抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、药物组合物及用途制造技术

本发明专利技术涉及抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、药物组合物及用途。本发明专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，提供了抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、其药物组合物及其用途。本发明专利技术的单克隆抗体能阻断CTLA4与B7的结合，解除CTLA4对机体的免疫抑制，激活T淋巴细胞。胞。

【技术实现步骤摘要】
抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、药物组合物及用途
[0001]本申请是申请日为2015年7月31日的中国专利申请201580 040171.X“抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、药物组合物及用途”的分案申请。


[0002]本专利技术属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及抗CTLA4的单克隆抗体或其抗原结合片段、其药物组合物、编码它们的序列，以及应用它们进行诊断、预防、治疗和/或辅助治疗的方法和用途。

技术介绍

[0003]细胞毒性T淋巴细胞相关抗原
‑
4(cytotoxic T lymphocytesociated antigen 4，亦简称为CTLA4)与CD28分子在基因结构、染色体定位、序列的同源性及基因表达具有十分相近的关系，都是共刺激分子B7的受体，主要表达于被激活T细胞表面。但是作为淋巴细胞激活的共刺激信号，CTLA4与CD28分子的功能是相反的，CTLA4 与B7结合后能抑制小鼠和人T细胞的激活，在T细胞活化中起负调节作用。
[0004]CTLA4 mAb或CTLA4配体可以阻止CTLA4与其天然配体结合，从而封闭CTLA4对T细胞负性调节信号的传导，增强T细胞对各种抗原的反应性，在这方面体内与体外研究结果基本一致。目前已有CTLA4 mAb(10D1，11.2.2)处于临床试验阶段用于治疗前列腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃肠道癌、肝癌、恶性黑色素瘤等(GrossoJF.，Jure
‑
Kunkel MN.，CTLA
‑
4blockade in tumor models：anoverview of preclinical and translational research.Cancer Immun. 2013；13：5.Epub 2013Jan 22；US 6984720 B1以及US 6682736 B1)，其中10D1和11.2.2被视为目前效果最好的CTLA4单克隆抗体之一。
[0005]白细胞介素2(IL
‑
2)由T细胞产生，是调节T细胞亚群的生长因子，也是调控免疫应答的重要因子，并可促进活化B细胞增殖，参与抗体反应、造血和肿瘤监视。重组的人IL
‑
2已经被美国FDA批准用于治疗恶性肿瘤(包括黑色素瘤、肾肿瘤等)，同时正在进行治疗慢性病毒感染的临床研究(Chavez，A.R.，et al.，Pharmacologicadministration of interleukin
‑
2.Ann N Y Acad Sci，2009.1182：p. 14
‑
27)。
[0006]CTLA4及CTLA4 mAb作为T细胞功能状况的重要影响因素，通过干预机体免疫微环境，可对疾病产生特异性治疗作用，并发挥较高疗效，补充传统用药的不足，由此开辟基因治疗的新途径。CTLA4 及CTLA4 mAb应用于试验及临床各阶段：如在自身免疫性疾病中有效抑制哮喘动物模型的气道高反应性、阻止风湿性疾病的发展以及在同种异体移植中介导机体免疫耐受等。但同时，尽管生物基因治疗在短期临床试验研究中未发现不良反应，我们亦应注意到其长期应用所存在的潜在影响，如CTLA4 mAb过度阻断CTLA4
‑
B7信号则可导致自身免疫性疾病的发生。由于抗体可以特异结合其配体并导致靶细胞溶解或阻断病理进程，所以抗体尤其人源性抗体药物的开发利用对人类恶性肿瘤及其他免疫性疾病临床治疗有重要意义。
[0007]目前，尚需要开发新的阻断CTLA4与B7的结合的抗体及其人源化抗体。

技术实现思路

[0008]本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，利用哺乳动物细胞表达系统表达出重组的CTLA4作为抗原免疫小鼠，经小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞。专利技术人通过进行对大量样本的筛选，得到了一种杂交瘤细胞株能够分泌产生与CTLA4特异性结合的特异性单克隆抗体，并且该单克隆抗体能够十分有效地阻断CTLA4与B7 的结合。并进一步制得了人源化抗体。由此提供了下述专利技术：
[0009]本专利技术的一个方面涉及单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
[0010]所述的单克隆抗体包括选自下列的互补决定区(CDR)：
[0011]包含氨基酸序列为SEQ ID NO：27的HCDR1，
[0012]包含氨基酸序列为SEQ ID NO：28的HCDR2，以及
[0013]包含氨基酸序列为SEQ ID NO：29的HCDR3；
[0014]和/或
[0015]包含氨基酸序列为SEQ ID NO：30的LCDR1，
[0016]包含氨基酸序列为SEQ ID NO：31的LCDR2，以及
[0017]包含氨基酸序列选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33和SEQID NO：34的LCDR3。
[0018]根据本专利技术任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
[0019]所述单克隆抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：18；
[0020]和/或
[0021]所述单克隆抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列选自SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：20、SEQID NO：22和SEQ ID NO：24。
[0022]根据本专利技术任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
[0023]所述单克隆抗体包括：
[0024](1)如SEQ ID NO：6所示的VH和如SEQ ID NO：8所示的 VL；
[0025](2)如SEQ ID NO：10所示的VH和如SEQ ID NO：12所示的VL；
[0026](3)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：16所示的VL；
[0027](4)如SEQ ID NO：18所示的VH和如SEQ ID NO：20所示的VL；
[0028](5)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：22所示的VL；或
[0029](6)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：24所示的VL。
[0030]本专利技术中，上述(1)
‑
(6)组单抗分别为8D2/8D2(Re)、8D2H1L1、 8D2H2L2、8D2H3L3、8D2H2L15和8D2H2L17的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。
[0031]具体地，SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：14中的第18位的蛋氨酸(Met)独立地被选自如下的氨基酸所替代：
[0032]亮氨酸(Leu)、缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)或丙氨酸(Ala)。
[0033]抗体治疗药物，特别是单克本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体包括选自下列的互补决定区(CDR)：包含氨基酸序列为SEQ ID NO：27的HCDR1，包含氨基酸序列为SEQ ID NO：28的HCDR2，以及包含氨基酸序列为SEQ ID NO：29的HCDR3；和/或包含氨基酸序列为SEQ ID NO：30的LCDR1，包含氨基酸序列为SEQ ID NO：31的LCDR2，以及包含氨基酸序列选自SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34的LCDR3。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列选自SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：18；和/或所述单克隆抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列选自SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：16、SEQ lD NO：20、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24。3.根据权利要求3所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体包括：(1)如SEQ ID NO：6所示的VH和如SEQ ID NO：8所示的VL；(2)如SEQ ID NO：10所示的VH和如SEQ ID NO：12所示的VL；(3)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：16所示的VL；(4)如SEQ ID NO：18所示的VH和如SEQ ID NO：20所示的VL；(5)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：22所示的VL；或(6)如SEQ ID NO：14所示的VH和如SEQ ID NO：24所示的VL；具体地，SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：14中的第18位的蛋氨酸独立地被选自如下的氨基酸所替代：亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或丙氨酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab
′
、F(ab
′
)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体以小于大约10
‑5M，例如小于大约10
‑6M、10
‑7M、10
‑8M、10
‑9M或10
‑
10
M或更小的K
D
结合CTLA4蛋白。6.根据权利要求1至5中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的单克隆抗体包括非
‑
CDR区，且所述非
‑
CDR区来自不是鼠类的物种，例如来自人抗体。7.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中，所述抗体重链可变区包含氨基酸序列为SEQ ID NO：27
‑
29的CDR；具体地，所述抗体重链可变区具有SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列；
更具体地，所述核酸分子具有SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列。8.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中，所述抗体轻链可变区包含：1)氨基酸序列为SEQ ID NO：30
‑
32的CDR；2)氨基酸序列为SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31和SEQ ID NO：33的CDR；或3)氨基酸序列为SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31和...

【专利技术属性】
技术研发人员：李百勇，夏瑜，王忠民，张鹏，庞醒华，
申请(专利权)人：中山康方生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：