抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段及其应用。该抗体或其抗原结合片段具有很好的结合活性和阻断活性，抗肿瘤效果显著，有效延长小鼠生存期，显著降低健康人PBMC和肿瘤浸润淋巴细胞中Treg细胞比例，稳定性好，成药性好，能够广泛用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病。或肿瘤相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段及其应用
[0001]本申请要求申请日为2021年9月24日的中国专利申请(申请号：202111123523.1，专利技术名称：抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段及其应用)的优先权，该中国专利申请的全部内容通过引用整体结合到本申请。


[0002]本专利技术涉及生物医药领域，具体而言，涉及抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0003]TIGIT(T cell Ig and ITIM domain，也称为WUCAM，Vstm3，VSIG9)是含ITT结构域(免疫球蛋白酪氨酸尾部基序结构域)及ITIM结构域(免疫受体酪氨酸抑制基序结构域)的T细胞和NK细胞共有的抑制性受体，属于I型跨膜蛋白，包括IgV胞外段以及免疫球蛋白酪氨酸尾巴样磷酸化片段。该基因在2008年由Genentech公司的研究组发现。该研究组通过在基因组中搜索符合特定条件(
①
表达在免疫细胞上；
②
属于I型跨膜蛋白；
③
胞外带有免疫球蛋白结构域；
④
胞内带有免疫调节结构域)的基因而寻找到这个基因。通过序列比对，发现这个蛋白隶属于一个较大的PVR蛋白家族，其成员包括与TIGIT竞争配体的活化型受体CD226和CD96，以及它们的配体PVR，等等。2012年，TIGIT分子的晶体结构通过X射线衍射得到解析，研究发现免疫细胞上表达的TIGIT首先形成同一细胞上的顺式同源二聚体，然后该二聚体各通过一侧的一个TIGIT分子结合一个PVR分子，并且发现预先形成的同源二聚体对于TIGIT
‑
PVR相互作用是必须的，因为如果预先将TIGIT
‑
TIGIT结合界面的氨基酸进行突变，则TIGIT
‑
PVR的相互作用会被破坏。
[0004]TIGIT分子较为保守，人类TIGIT分子与猴、小鼠的TIGIT分别具有88％、58％的序列同源性。TIGIT在免疫细胞如T细胞，NK细胞和树突细胞表面表达，与癌细胞表面的PVR(脊髓灰质炎病毒受体，CD155)结合，抑制免疫细胞的活性。TIGIT的主要配体为CD155(Necl
‑
5，PVR脊髓灰质炎病毒受体)以及CD112(PVRL2，Nectin
‑
2)。其中又以与CD155的结合亲和力最高(3.15nM，Kd)，两个TIGIT分子与两个CD155分子形成四聚体“锁钥结构”(TIGIT的Try113与CD155的AX6G，以及CD155的Phe128和TIGIT的AX6G分别形成“钥
‑
锁”)。这两个配体同时也是CD226(DNAM
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1)的配体，CD226与TIGIT竞争，刺激T细胞活性。配体与TIGIT之间的相互作用打败了CD226，使免疫活性受到抑制，肿瘤细胞上调CD155和CD122以逃避免疫介导的破坏作用。
[0005]因此，对TIGIT具有特异性的拮抗性抗体可抑制CD155和CD112诱导的T细胞反应且增强抗肿瘤免疫，开发能够特异性结合TIGIT的抗体对预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是开发与TIGIT蛋白高亲和力和特异性结合的抗人
TIGIT抗体，并进行人源化改造，以降低抗体免疫源性风险，同时保持抗体的功能活性。
[0007]本专利技术提供了抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含轻链CDR区和重链CDR区，轻链CDR区由LCDR1、LCDR2、LCDR3组成，重链CDR区由HCDR1、HCDR2、HCDR3组成，LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列依次选自SEQ ID NO:29～31或SEQ ID NO:32～34，HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列依次选自SEQ ID NO:35～37或SEQ ID NO:38～40，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5～15或SEQ ID NO:21～28任一所示。
[0008]本专利技术还提供了核酸，所述核酸编码所述抗体或其抗原结合片段。
[0009]本专利技术还提供了载体，所述载体包含所述核酸。
[0010]本专利技术还提供了细胞，所述细胞携带所述核酸、含有所述载体或表达所述抗体或其抗原结合片段。
[0011]本专利技术还提供了生产所述抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在培养基中培养所述细胞；以及从培养基中或从所培养的细胞中回收如此产生的抗体或其抗原结合片段。
[0012]本专利技术还提供了药物组合物，所述组合物含有所述抗体或其抗原结合片段、或所述核酸、或所述载体或所述细胞。
[0013]本专利技术还提供了所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述载体、所述细胞、所述药物组合物在制备用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病的药物中的应用。
[0014]本专利技术还提供了用作药物的前面任一所述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞或药物组合物；在一些技术方案中，所述药物用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病。
[0015]本专利技术还提供一种预防或治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的前面任一所述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞或药物组合物；在一些技术方案中，所述疾病为免疫性疾病、或肿瘤相关疾病。
[0016]上述抗TIGIT人源化抗体与TIGIT具有较高的亲和力，且具有多方面的功能特性，可单独或与其它试剂组合用于预防或治疗免疫性疾病、或肿瘤相关疾病。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1是不同亚型anti
‑
TIGIT抗体减少Balb/c小鼠中CT26结肠癌的平均肿瘤体积结果图。
[0019]图2是不同亚型anti
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TIGIT抗体对Balb/c小鼠生存期的影响结果图。
[0020]图3是TIGIT
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5鼠单抗、3TIGIT
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16鼠单抗减少hTIGIT knock in小鼠中CT26结肠癌的平均肿瘤体积结果图。
[0021]图4是TIGIT
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5鼠单抗、3TIGIT
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16鼠单抗对hTIGIT knock in小鼠生存期的影响结果图。
[0022]图5是hIgG1亚型的抗TIGIT人源化抗体减少hTIGIT knock in小鼠中CT26结肠癌的平均肿瘤体积结果图。
[0023]图6是mIgG2a亚型的抗TIGIT人源化抗体减少hTIGIT knock in小鼠中CT26结肠癌的平均本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗TIGIT人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含轻链CDR区和重链CDR区，轻链CDR区由LCDR1、LCDR2和LCDR3组成，重链CDR区由HCDR1、HCDR2和HCDR3组成，LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列依次选自SEQ ID NO:29～31或SEQ ID NO:32～34，HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列依次选自SEQ ID NO:35～37或SEQ ID NO:38～40，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，或如SEQ IDNO:5～13、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:21～28任一所示。2.根据权利要求1所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQID NO:16～20任一所示。3.根据权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，或如SEQ ID NO:5～13、15任一所示，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:4任一所示；或者所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:21～28任一所示，且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16～20任一所示；可选的，所述抗体的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列如下：编号轻链可变区重链可变区1SEQ ID NO:3SEQ ID NO:142SEQ ID NO:16SEQ ID NO:213SEQ ID NO:1SEQ ID NO:54SEQ ID NO:1SEQ ID NO:125SEQ ID NO:4SEQ ID NO:116SEQ ID NO:4SEQ ID NO:157SEQ ID NO:2SEQ ID NO:128SEQ ID NO:2SEQ ID NO:139SEQ ID NO:2SEQ ID NO:1410SEQ ID NO:2SEQ ID NO:1511SEQ ID NO:4SEQ ID NO:1412SEQ ID NO:16SEQ ID NO:2213SEQ ID NO:20SEQ ID NO:2814SEQ ID NO:19SEQ ID NO:2415SEQ ID NO:20SEQ ID NO:2416SEQ ID NO:18SEQ ID NO:2517SEQ ID NO:18SEQ ID NO:2618SEQ ID NO:18SEQ ID NO:274.根据权利要求1
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3任一项所述抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，且重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；或所述抗体的轻链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：芦迪，胡佩佩，欧颖烨，霍永庭，刘云鹏，罗甜，路力生，
申请(专利权)人：广东菲鹏制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：