一种HPV中和抗体的高通量检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种HPV中和抗体的高通量检测方法。本发明专利技术建立了一种基于HPV假病毒的中和抗体的高通量检测方法，该方法首次使用384孔板进行假病毒中和试验，并对靶细胞加入量、血清假病毒混合物孵育时间、细胞板培养时间进行优化调整，最终大大提高了每次实验样本的通量，缩短了试验操作时间，特异性、精密度、线性范围、检测限、耐用性等性能较好；可配合机器稀释、转板以及读板的自动化过程。动化过程。

【技术实现步骤摘要】
一种HPV中和抗体的高通量检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种HPV中和抗体的高通量检测方法。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)属于乳头瘤病毒科的乳头瘤病毒属，为球形无包膜的双链DNA病毒。病毒基因组为双链环状DNA，约7.8～8.0kb，分为早期区、晚期区和调节区。早期区编码与病毒复制、转录调控和细胞转化有关的蛋白(如E5，E6，E7)，晚期区编码主要壳体蛋白L1和次要壳体蛋白L2。该病毒能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，症状表现为寻常疣、生殖器疣(尖锐湿疣)等。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多，人乳头瘤病毒(HPV)感染越来越引起人们的关注。其中，HPV16、HPV18等型别的感染是引发宫颈癌的主要原因。宫颈癌是危害女性健康的第二大恶性肿瘤，95％以上的宫颈癌病理组织中能够检测到HPV DNA，HPV预防性疫苗是预防HPV感染及宫颈癌的最根本手段。而预防性疫苗成功与否的关键在于其能否诱导机体产生高滴度针对HPV的中和抗体。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的的HPV中和抗体的高通量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将待测样本在96孔板中稀释后转板至384孔板，96孔板中的一孔转移至384孔板中的两复孔，加入HPV假病毒，孵育，离心，接种细胞；步骤2：在384孔板中设置添加HPV假病毒和细胞的病毒对照孔，以及添加细胞的细胞对照孔；步骤3：将经过步骤1～2处理的384孔板进行培养，经读板仪检测，分别获得样本检测值、病毒对照值和细胞对照值；步骤4：计算感染抑制率(％)＝1
‑
(样本检测值
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细胞对照值)/(病毒对照值
‑
细胞对照值)
×
100％；以待测样本的稀释倍数为X，以对应的感染抑制率为Y，用Reed
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Muench法获得所述待测样本的中和滴度ID50。2.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1中所述稀释的倍数为10～40960倍。3.根据权利要求1所述的高通量检测方法，其特征在于，步骤1～2中所述细胞的接种密度为7.5
×
102～1.2
×
104个/孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佑春，刘欢，张黎，秦海洋，聂建辉，黄维金，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：