恩西地平在培养CAR-T细胞中的应用制造技术

本发明专利技术公开了恩西地平在培养CAR

【技术实现步骤摘要】
恩西地平在培养CAR
‑
T细胞中的应用


[0001]本专利技术涉及嵌合抗原受体T细胞的产品制备和免疫治疗领域，尤其涉及恩西地平在培养CAR
‑
T细胞中的应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell，CAR
‑
T)疗法是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，其通过体外基因编辑技术将CAR基因稳定整合至人的T淋巴细胞基因组，使T细胞表达嵌合抗原受体(CAR)，成为CAR
‑
T细胞。CAR基因通常编码一个用于结合靶抗原的单链抗体可变区片段、跨膜结构域和细胞内信号结构域(如CD3ζ胞内结构域等)。当CAR
‑
T细胞进入患者体内，则联合抗体作用和T淋巴细胞的效应功能，以非MHC限制性方式高特异性识别靶抗原，释放多种效应因子，从而高效地杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。靶向CD19的CAR
‑
T技术治疗B细胞恶性肿瘤的基础研究与临床试验已取得里程碑式突破，治疗急性B淋巴母细胞白血病有效率在70％以上，治疗B细胞型非霍奇金淋巴瘤在50％以上。CAR
‑
T治疗其他肿瘤也显示了良好的应用前景。然而，仍有半数以上患者在CAR
‑
T免疫治疗后未能完全缓解或复发。另外，现在研究认为患者体内CAR
‑
T细胞的记忆表型维持和耗竭水平直接与CAR
‑
T细胞持久性相关，影响患者疗效。因此，提高CAR/>‑
T细胞体内的持久性成为了亟需解决的技术问题。
[0003]T细胞介导的适应性免疫反应源于抗原特异性T细胞的克隆性扩增和不同功能亚群的分化，而T细胞扩增和分化对能量代谢和生物合成有极大的需求。T细胞活化后从脂肪酸氧化和丙酮酸氧化转为糖酵解和谷氨酰胺分解，并产生包括核苷酸、氨基酸和脂肪酸中间产物，为T细胞的增殖和功能所必需。越来越多的证据显示，代谢平衡是免疫细胞功能和持久性的最客观决定因素。另外，肿瘤微环境(TME)为缺氧并缺乏关键营养元素的限制性环境，会导致免疫细胞耗竭。细胞疗法领域需要致力于代谢调节以增加免疫细胞疗法的持久性、归巢性、有效性和安全性。
[0004]恩西地平(Enasidenib，分子式C
19
H
17
F6N7O，CAS号1446502
‑
11
‑
9)是一种异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)抑制剂，由Agios和Celgene联合开发，于2017年8月1日由美国食品药品管理局(FDA)批准上市，用于治疗携带IDH2基因突变的成人复发或难治性AML。三羧酸循环对于许多的生化信号通路至关重要，IDH2是三羧酸循环中的关键酶，该蛋白的某些突变形式(R140Q，R172S，R172K)导致特异性代谢产物2
‑
羟基戊二酸(2
‑
HG)升高，恩西地平可降低2
‑
HG的含量从而诱导白血病细胞分化。
[0005]而恩西地平处理CAR
‑
T细胞后，CAR
‑
T细胞的耗竭情况是未知的，以及使用恩西地平联合恩西地平处理后的CAR
‑
T细胞在体内的抗肿瘤作用在现有技术中也没有进行报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对CAR
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T细胞体外培养过程中和体内治疗存在的技术问题，提供了恩西地平在培养CAR
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T细胞中的应用，准确提供IDH2抑制剂恩西地平优化CAR
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T细胞产品的制备
工艺，及二者联合治疗肿瘤的应用。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]本专利技术提供了恩西地平在培养CAR
‑
T细胞中的应用，所述恩西地平为恩西地平本身或药学上可接受的盐。
[0009]本专利技术提供了一种培养基，所述培养基中含有恩西地平；所述恩西地平为恩西地平本身或药学上可接受的盐。
[0010]优选的，所述恩西地平的浓度为5
‑
10μM。更为优选的，所述恩西地平的浓度为5μM。
[0011]本专利技术还提供了所述培养基在CAR
‑
T细胞培养中的应用。
[0012]本专利技术还提供了一种CAR
‑
T细胞的培养方法，使用所述的培养基培养CAR
‑
T细胞。
[0013]本专利技术还提供了一种药物组合物，包括恩西地平或药学上可接受的盐，以及CAR
‑
T细胞。这里所述的CAR
‑
T细胞指的是未经恩西地平共同培养处理过的CAR
‑
T细胞。
[0014]优选的，所述药物组合物中恩西地平的剂型为液体注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、膏剂、颗粒剂或敷料；CAR
‑
T细胞为液体注射剂。
[0015]优选的，当所述药物组合物中恩西地平的剂型为粉针剂时，恩西地平的剂量为15mg/kg；注射CAR
‑
T细胞的剂量为2
×
106/mL。
[0016]优选的，在注射CAR
‑
T细胞后的第二天再施用恩西地平。
[0017]按照2
×
106/mL向小鼠尾静脉注射CAR
‑
T细胞，第二天在体内施用恩西地平，以15mg/kg的剂量联合CAR
‑
T细胞能够显著增强肿瘤治疗效果，延长荷瘤小鼠的生存期。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]本专利技术提供了恩西地平在培养CAR
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T细胞中的应用，一种基于IDH2抑制剂的CAR
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T细胞和制备方法，以及IDH2抑制剂联合CAR
‑
T细胞作为药物组合物，本专利技术方法简单易行，通过在CAR
‑
T细胞培养过程中添加IDH2抑制剂或体内二者联合治疗肿瘤，能够明显的增加免疫细胞持续性及杀伤功能，很大程度上解决了细胞治疗过程中的难治复发问题，延长患者的生存期。
附图说明
[0020]图1为CAR结构示意图。
[0021]图2为不同浓度IDH2抑制剂培养CAR
‑
T细胞亚群分化比例和统计图；其中，*P＜0.05，**P＜0.01，NS表示没有统计学差异。
[0022]图3为不同浓度IDH2抑制剂CAR
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T培养细胞，流式检测PD
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1、LAG
‑
3、TIM
‑
3耗竭指标的表达变化和凋亡水平的检测图；其中，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001，NS表示没有统计学差异。
[0023]图4为IDH2抑制剂CAR
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T培养细胞3天后输注体内的处理过程示意图。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.恩西地平在培养CAR
‑
T细胞中的应用，所述恩西地平为恩西地平本身或药学上可接受的盐。2.一种培养基，其特征在于，所述培养基中含有恩西地平；所述恩西地平为恩西地平本身或药学上可接受的盐。3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述恩西地平的浓度为5
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10μM。4.如权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述恩西地平的浓度为5μM。5.权利要求2～4任一所述培养基在CAR
‑
T细胞培养中的应用。6.一种CAR
‑
T细胞的培养方法，其特征在于，使用权利要求2～4任一项所述的培养基培养CAR
‑
T细胞。7.一种药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄河，司晓慧，邵谧，滕心怡，黄玥，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：