一株可保护肠道上皮细胞层的短双歧杆菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一株可保护肠道上皮细胞层的短双歧杆菌及应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了短双歧杆菌CCFM683在保护肠道上皮细胞层方面的新用途；通过短双歧杆菌CCFM683干预能够显著改善DSS诱导的损坏的肠道上皮细胞层，减轻结肠上皮细胞的损伤，保护肠道上皮细胞层的完整性；上调抗凋亡蛋白Bcl

【技术实现步骤摘要】
一株可保护肠道上皮细胞层的短双歧杆菌及应用


[0001]本专利技术涉及一株可保护肠道上皮细胞层的短双歧杆菌及应用，属于微生物


技术介绍

[0002]肠道屏障是指能够阻止肠腔内病原菌和毒素穿过肠黏膜入侵到血液系统和其它组织器官的结构和功能的总和，对人体健康起重要作用。肠道屏障由机械屏障、免疫屏障、生物屏障和化学屏障共同构成。肠道黏液层、上皮细胞层及紧密连接构成了肠道的第一道防线
‑
肠道机械屏障，起维护肠道屏障功能的作用。肠道上皮细胞层由杯状细胞，M细胞，潘氏细胞等细胞组成紧密的结构，阻止肠道有害微生物和毒素进入肠道固有层，对肠道功能具有重要的影响。许多肠道相关的疾病，如结肠炎，易激性肠炎，腹泻，便秘等肠道疾病都与肠道上皮细胞层的破坏直接相关。因此，维护肠道上皮细胞层的正常是保护肠道健康的关键之一。结肠炎，便秘，腹泻，易激性肠炎等肠道疾病会对肠道造成较大的影响，会影响患者的生活质量，导致社会、心理和专业领域的变化。使用药物进行常规治疗的研究越来越多，目的是减少症状和炎症。长期使用肠道炎症相关的药物(抑制剂类，激素类，抗生素类)可能会导致高血压、糖尿病、骨质疏松等其他疾病，从而影响治疗的成功。
[0003]鉴于现有治疗方案存在的多种问题，替代传统方法的方案显得尤为重要了，新的治疗方案包括单克隆抗体、益生元、益生菌等。而上述多种疗法的可行性也促使我们继续寻找应用更广泛、潜力更巨大，同时又具有保护肠道上皮细胞层作用的膳食补充剂。益生菌对便秘、肠炎、腹泻、非酒精性脂肪肝、糖脂代谢紊乱、情绪及行为障碍均具有显著改善作用，而这与益生菌对肠道上皮细胞层的保护密切相关。因此，筛选对肠道上皮细胞层具有保护作用的益生菌显得尤为重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)CCFM683在制备保护肠道上皮细胞层的产品中的应用，所述短双歧杆菌CCFM683已于2015年12日04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.11828，并公开于公开号为CN106038611A。
[0005]在一种实施方式中，所述产品为药物或保健品。
[0006]在一种实施方式中，所述药物还含有药物载体和/或药用辅料。
[0007]在一种实施方式中，所述产品为含有所述短双歧杆菌CCFM683的制剂，所述制剂中的短双歧杆菌CCFM683数量≥1
×
10
10
CFU/g或1
×
10
10
CFU/mL。
[0008]在一种实施方式中，所述制剂为短双歧杆菌CCFM683的菌悬液。
[0009]在一种实施方式中，所述制剂为短双歧杆菌CCFM683的冻干菌粉。
[0010]在一种实施方式中，所述菌悬液的制备方法为：将所述短双歧杆菌CCFM683接种至种子培养基中进行培养，得到种子液；将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到细胞培
养液；将细胞培养液离心，收集菌泥；将菌泥清洗后重悬，得到菌悬液。
[0011]在一种实施方式中，所述冻干菌粉的制备方法为：向所述菌悬液中添加冻干保护剂，得到混合液；将混合液真空冷冻干燥，得到冻干粉。
[0012]在一种实施方式中，将种子液按2～4％(v/v)的接种量接种到培养基中进行培养。
[0013]在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分包括脱脂乳粉、海藻糖、蔗糖和水。
[0014]在一种实施方式中，所述冻干保护剂为含80
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120g/L脱脂乳粉、80
‑
140g/L海藻糖、140
‑
180g/L蔗糖的溶液。
[0015]在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分为100g/L脱脂乳粉、100g/L海藻糖、160g/L蔗糖。
[0016]在一种实施方式中，所述冻干保护剂在重悬液中的添加量为菌泥总重量的2～4倍。
[0017]在一种实施方式中，种子培养基为mMRS固体培养基，发酵培养基为mMRS液体培养基。
[0018]在一种实施方式中，所述mMRS液体培养基是加了半胱氨酸盐酸盐的MRS液体培养基。
[0019]在一种实施方式中，所述半胱氨酸盐酸盐的添加量为按质量分数0.04
‑
0.1％。
[0020]在一种实施方式中，将种子液按2
‑
4％的接种量接种到mMRS液体培养基中进行培养的培养条件为：34
‑
38℃厌氧培养24h～36h，7000
‑
12000rmp离心20～30min，收集菌泥，用生理盐水清洗3～4次后重悬。
[0021]在一种实施方式中，所述保护肠道上皮细胞层包括缓解和/或治疗肠道上皮细胞层损坏。
[0022]在一种实施方式中，所述肠道上皮细胞层损坏是由DSS诱导的肠道上皮细胞层损坏。
[0023]在一种实施方式中，所述缓解和/或治疗肠道上皮细胞层损坏包括如下至少一种功能：
[0024](1)保护上皮细胞完整性；
[0025](2)降低上皮细胞促凋亡蛋白，上调抗凋亡蛋白；
[0026](3)抑制上皮细胞凋亡；
[0027](4)阻止肠腔细菌通过上皮细胞层发生易位。
[0028]有益效果：
[0029](1)本专利技术所提供的短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)CCFM683分离自新生儿的肠道菌群，该菌株对人体无毒副作用，因此采用本专利技术提供的短双歧杆菌CCFM683制备的药物，相对于用于保护肠道上皮细胞层的传统药物具有一定的优势，并且该菌株可用于制作益生菌制剂等，具有广阔的市场前景；
[0030](2)本专利技术提供了短双歧杆菌CCFM683在保护肠道上皮细胞层方面的新用途；通过短双歧杆菌CCFM683干预能减轻结肠上皮细胞的损伤，保护肠道上皮细胞层的完整性；上调抗凋亡蛋白Bcl
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2，下调促凋亡蛋白Bad；显著降低上皮细胞凋亡的数量，维护上皮细胞层的完整；并能阻止肠道细菌通过上皮细胞层易位到固有层引起肠道免疫反应。
附图说明
[0031]图1：短双歧杆菌CCFM683对小鼠结肠上皮细胞层的影响；
[0032]图2：短双歧杆菌CCFM683对小鼠结肠凋亡相关蛋白的影响；
[0033]图3：短双歧杆菌CCFM683对小鼠结肠上皮细胞凋亡的影响；
[0034]图4：短双歧杆菌CCFM683对肠腔细菌易位的影响；
[0035]图1～4中，“*”、“**”、“***”、“****”均表示与DSS组对比具有显著性差异，*越多，显著性差异越大，误差以Mean
±
SEM的形式展现。
具体实施方式
[0036]下面结合具体实施例和附图对本专利技术进行进一步的阐述。
[0037]短双歧杆菌CCFM683为本研究团队自有菌株，已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)CCFM683在制备保护肠道上皮细胞层的产品中的应用，其特征在于，所述短双歧杆菌CCFM683保藏编号为CGMCC No.11828。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为药物或保健品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物还含有药物载体和/或药用辅料。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为含有所述短双歧杆菌CCFM683的微生物制剂，所述微生物制剂中的短双歧杆菌CCFM683数量≥1
×
10
10
CFU/g或1
×
10
10
CFU/mL。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述微生物制剂为短双歧杆菌CCFM683的菌悬液。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述微生物制剂为短双歧杆菌C...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨波，陈卫，陈洋，陈海琴，刘小鸣，赵建新，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：