检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用；所述目标区域包括如下定义的区域1或其部分区域：以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr1:41382214

【技术实现步骤摘要】
检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用。

技术介绍

[0002]膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国呈逐年增加的趋势。根据组织来源，膀胱癌可以分为膀胱尿路上皮癌、膀胱鳞癌、膀胱腺癌、膀胱肉瘤等，其中膀胱尿路上皮癌是最常见的病理类型，约占所有膀胱癌发病率的90％以上。根据治疗模式及疾病预后的不同，膀胱癌又可分为非肌肉浸润性疾病(NMIBC)和肌肉浸润性疾病(MIBC)。膀胱癌的5年生存率与确诊时的疾病分期有关，原位癌的5年生存率高达95.8％，而转移性膀胱癌的5年生存率低至4.6％。虽然早期膀胱癌治愈率较高，但是多数患者经尿道电切术后有复发的风险，因此需要在术后进行膀胱癌的监测。膀胱癌的早期筛查、早期治疗和复发监测对于提高患者的生存率至关重要。
[0003]目前膀胱癌的诊断和术后监测的主要方法为膀胱镜检查以及病理活检。虽然此方法是诊断膀胱癌的金标准，但是膀胱镜检查时会给患者带来巨大的痛苦，且存在尿道穿孔、出血或感染的可能性。一些无创的检测方法，如尿液脱落细胞学检测和染色体荧光原位杂交等，其诊断膀胱癌尤其是早期肿瘤的灵敏度较低，不能满足临床需求，因此急需一种高灵敏度的诊断膀胱癌的方法。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的包括提供检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用，本专利技术实施例用FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的检测试剂制备膀胱癌诊断试剂盒，采用该试剂盒能够高灵敏度地检出膀胱癌，为膀胱癌的筛查和诊断提供新的技术方案。
[0006]在本专利技术的第一方面，检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用；
[0007]所述目标区域包括如下定义的区域1或其部分区域：
[0008]以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr1:41382214
‑
41382419。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述区域1的部分区域选自如下定义的区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7、区域8和区域9中的一个或者多个：
[0010]区域2为Chr1:41382215
‑
41382419正链，
[0011]区域3为Chr1:41382389
‑
41382214负链，
[0012]区域4为Chr1:41382253
‑
41382390正链，
[0013]区域5为Chr1:41382247
‑
41382365正链，
[0014]区域6为Chr1:41382286
‑
41382390正链，
[0015]区域7为Chr1:41382334
‑
41382235负链，
[0016]区域8为Chr1:41382366
‑
41382288负链，以及
[0017]区域9为Chr1:41382316
‑
41382217负链。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的甲基化引物对和非甲基化引物对：
[0021]检测所述区域2的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，
[0022]检测所述区域2的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示，
[0023]检测所述区域3的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，以及，
[0024]检测所述区域3的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针：
[0026]检测所述区域4的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，
[0027]检测所述区域5的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.19所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示，
[0028]检测所述区域6的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，
[0029]检测所述区域7的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.24和SEQ ID NO.25所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示，
[0030]检测所述区域8的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，以及
[0031]检测所述区域9的检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.30和SEQ ID NO.31所示，对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂还包含检测内参基因的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针；可选地，所述内参基因包含ACTB基因，所述ACTB基因对应SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34所示的检测引物对和SEQ ID NO.35所示的检测探针。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，检测的样本包括细胞样本、组织样本或者尿液样本。
[0034]在本专利技术第二方面，提供一种膀胱癌诊断试剂盒，包括第一方面所定义的试剂。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述诊断试剂盒还包含测序试剂、扩增试剂、将未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂和DNA提取试剂中的一种或者多种；可选地，所述扩增试剂包括扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和Mg
2+
中的一种或者多种。
[0036]相对于传统技术，本专利技术具备如下有益效果：
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测FOXO6基因中目标区域的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌诊断产品中的应用；所述目标区域包括如下定义的区域1或其部分区域：以GRCh38.p14为参考，区域1为Chr1:41382214
‑
41382419。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述区域1的部分区域选自如下定义的区域2、区域3、区域4、区域5、区域6、区域7、区域8和区域9中的一个或者多个：区域2为Chr1:41382215
‑
41382419正链，区域3为Chr1:41382389
‑
41382214负链，区域4为Chr1:41382253
‑
41382390正链，区域5为Chr1:41382247
‑
41382365正链，区域6为Chr1:41382286
‑
41382390正链，区域7为Chr1:41382334
‑
41382235负链，区域8为Chr1:41382366
‑
41382288负链，以及区域9为Chr1:41382316
‑
41382217负链。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和荧光定量法。4.根据权利要求2或者3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述目标区域的甲基化水平的引物对，或者还包括检测所述目标区域的检测探针。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括具备如下技术特征中的一个或者多个的检测所述目标区域的甲基化水平的甲基化引物对和非甲基化引物对：检测所述区域2的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，检测所述区域2的非甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示，检测所述区域3的甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡迪，张良禄，董兰兰，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：