一种肿瘤特异性TCR的筛选方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤特异性TCR的筛选方法及其应用，筛选方法包括步骤：从肿瘤组织分离出TILs；敲断TILs基因组中的目的基因插入报告基因，获得修饰后的TILs；将修饰后的TILs与肿瘤组织细胞共培养以激活修饰后的TILs；对激活后的TILs进行筛选，选出报告基因中高表达的TILs；对选出的报告基因中高表达的TILs进行单克隆培养，获得肿瘤特异性TCR单克隆细胞。本发明专利技术将基因敲入系统和TCR筛选相结合，利用基因敲入系统精准的将报告基因插入TILs的IL

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤特异性TCR的筛选方法及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫
，尤其涉及一种肿瘤特异性TCR的筛选方法及其应用。

技术介绍

[0002]目前大多数肿瘤，尤其是晚期肿瘤，仍然无法治愈。最新报道专注于重新增强患者自身免疫系统的免疫疗法的为癌症患者带来了新的希望，尤其是在治疗白血病、淋巴瘤和晚期黑色素瘤等方面取得了可喜的成果。肿瘤免疫疗法中最有效的治疗策略之一是过继性T细胞疗法。过继性T细胞疗法分为三种类型：肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR
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T)和表达工程T细胞受体T细胞(TCR
‑
T)。过继性T细胞疗法通常是将患者自身的T细胞分离，随后激活或通过基因编辑技术将T细胞改造并扩增，最后重新注射到患者体内。虽然CAR
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T细胞靶向表面肿瘤抗原，但TCR
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T细胞还可以通过人类白细胞抗原(HLA)呈递来靶向细胞内蛋白质，这意味着TCR
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T细胞可以识别范围广泛的不限于膜表达的肿瘤抗原，包括未知的新抗原。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤特异性TCR的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：获取肿瘤组织并将肿瘤组织中对应的TILs分离出来；敲断所述TILs基因组中的目的基因IL
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2，并将报告基因插入至所述IL
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2的启动子下游，获得修饰后的TILs；将修饰后的TILs与肿瘤组织细胞共培养，以激活修饰后的TILs；对激活后的TILs进行筛选，选出所述报告基因中高表达的TILs；对选出的报告基因中高表达的TILs进行单克隆培养，获得肿瘤特异性TCR单克隆细胞。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述TILs分离步骤之前，还包括步骤：构建表达gRNA和Cas9蛋白的质粒。3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，敲断所述TILs基因组的中目的基因IL
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2步骤中，是采用如下处理步骤实现的：将gRNA和Cas9蛋白的质粒通过递送系统转入分离的TILs中；gRNA与Cas9蛋白将目的基因IL
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2敲断，且所述报告基因通过AAV转导并插入至所述IL
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2的启动子下游。4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述质粒递送TILs步骤中，还包括如下处理：确定gRNA区域，选取脱靶率最低的gRNA基因序列；设计合成并构建gRNA表达载体。5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述gRNA靶向IL
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2...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽雅，黄璟，谢海涛，
申请(专利权)人：深圳市先康达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：