从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法及应用技术

本发明专利技术提供一种从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法及应用，具体为：将废弃烟叶晾晒粉碎，用95％的工业乙醇提取，减压浓缩提取液得到乙醇提取物浸膏，将乙醇提取物浸膏采用硅胶柱层析，洗脱剂按极性从小到大依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇来洗脱，然后将乙酸乙酯和正丁醇馏分减压浓缩，制得废弃烟叶有效抗炎部位。本发明专利技术简单绿色环保，同时可以得到烟叶抗炎有效部位，提高了废弃烟叶的利用率，为高值化利用废弃烟叶提供新思路和一定的实验依据。据。据。

【技术实现步骤摘要】
从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法及应用


[0001]本专利技术涉及烟草产品加工
，特别是涉及一种从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法及应用。

技术介绍

[0002]烟草作为一种高产的植物资源，其含有烟碱、茄尼醇、绿原酸等多种有效成分，应用于医药、生物、化学等领域，具有广阔的应用前景和良好的研究价值。但通过文献调研发现国内外对烟草抗炎方面的研究鲜见报道，对烟草及其废弃物加以利用，通过蒸馏、萃取等方式获得多种不同成分，进而实现高值化绿色利用和工业化规模生产，可为烟草行业综合利用废弃烟草提供新思路。

技术实现思路

[0003]为了解决综合利用废弃烟草及其抗炎活性研究方面不充分的问题，本专利技术提供了一种废弃烟叶抗炎提取物的制备及其应用。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法，包括如下步骤：
[0005](1)将干燥的废弃烟叶粉碎过40目筛，按料液比为1:10加入95％的工业乙醇回流提取3h，重复上述回流提取三次后合并三次提取液，提取液减压浓缩回收乙醇，制得烟叶醇提物浸膏；
[0006](2)将烟叶醇提物浸膏加入甲醇直至浸膏完全溶解后用40～80目硅胶拌样，采用硅胶柱层析，洗脱剂按极性从小到大依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇，然后将乙酸乙酯和正丁醇馏分减压浓缩，制得废弃烟叶抗炎有效部位。
[0007]进一步的，步骤(2)中，加入不同极性溶剂进行硅胶柱层析洗脱，每个极性部位洗脱至馏分用薄层层析显色无明显斑点。
[0008]本专利技术提取物通过高分辨质谱Q Exactive Focus分析鉴定抗炎有效部位中的化学成分并结合文献调研发现：抗炎有效部位中乙酸乙酯组具有抗炎活性的化合物有生物碱类1个((
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可替宁)，香豆素类1个(东莨菪内酯)，二萜类3个(冬凌草甲素，异甜菊醇，松香酸)，黄酮类2个(棕矢车菊素，石吊兰素)；正丁醇组具有抗炎活性的化合物有生物碱类1个((
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可替宁)，香豆素类1个(东莨菪内酯)，萜类3个(吉马酮，松香酸，穿心莲内酯)，黄酮类4个(芦丁，桑黄素，异槲皮苷，石吊兰素)。推测乙酸乙酯组和正丁醇组产生的抗炎活性作用可能与上述具有抗炎活性的化合物有着密切关系。
[0009]本专利技术的有益技术效果是：本专利技术通过加热回流、柱层析等方式获得乙酸乙酯组、正丁醇组两个抗炎有效部位。本专利技术简单绿色环保，有利于环境保护的生产同时可以得到废弃烟草中抗炎有效部位，提高了废弃烟草的利用率，为高值化利用废弃烟草提供了新思路。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0011]图1供试样品的制备流程图；
[0012]图2废弃烟叶中不同极性部位对RAW264.7细胞的细胞毒性图；
[0013]图3废弃烟叶中不同极性部位对RAW 264.7细胞生成NO的影响图。
具体实施方式
[0014]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0015]为了更好的理解本专利技术，下面结合具体实施方式作进一步说明。
[0016]1材料
[0017]1.1药物和试剂
[0018]废弃烟叶采自贵州省安顺市平坝区鼓楼办事处天马村品种为云烟87的烟草的干燥叶(贵州省贵阳市贵州省烟草科学研究院提供)，脂多糖(批号320V0317)购自北京索莱宝科技有限公司；NO检测试剂盒(批号022421210608)购自上海碧云天生物技术有限公司；青霉素链霉素双抗(批号2441838)、胎牛血清(批号2372879P)和DMEM培养基(批号8121336)均购自美国Gibco公司；细胞培养皿、冻存管、96孔板、细胞培养瓶均购自美国Corning公司；甲醇、乙腈试剂(色谱纯)均购自上海阿达玛斯试剂有限公司，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
[0019]1.2细胞
[0020]小鼠单核巨噬细胞RAW264.7均购自武汉普诺赛生命科技有限公司。
[0021]1.3仪器
[0022]Dionex Ultimate 3000RSLC/Thermo Scientific Q Exactive Focus型高分辨质谱仪、EPOCH型多功能酶标仪(美国Bio
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Tek公司)、3111型二氧化碳细胞培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)、离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)、立式压力蒸汽灭菌锅(上海博讯实业有限公司)、CX23型生物显微镜(日本Olympus公司)、HFsafe
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1200LC型生物安全柜(上海力新仪器有限公司)等。
[0023]2方法
[0024]2.1供试样品的制备
[0025]取干燥的废弃烟叶1kg，粉碎后过40目筛，用浓度为95％的工业乙醇提取3次，每次提取3h，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，即得烟叶醇提物浸膏；将烟叶醇提物浸膏完全溶解用40～80目硅胶拌样，按极性从小到大依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇进行硅胶柱层析洗脱，每个极性部位洗脱至馏分用薄层层析显色无明显斑点。然后将石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组和甲醇组馏分减压浓缩，称取上述4种不同极性部位和乙醇提取物适
量，用DMSO溶液将上述不同极性部位溶解，制得浓度为50mg/mL的药物母液，分别为石油醚组(M1)、乙酸乙酯组(M2)、正丁醇组(M3)、甲醇组(M4)和乙醇提取物组(M5)，置于4℃冰箱中保存，以备抗炎活性筛选实验所用。
[0026]2.2细胞的培养
[0027]将小鼠巨噬细胞RAW 264.7加入DMEM培养基(含10％胎牛血清及1％的青链霉素双抗)中，于37℃、5％CO2培养箱中传代培养，次日换液。
[0028]2.3生物活性筛选
[0029]利用LPS诱导RAW 264.7细胞建立炎症模型，以细胞培养基中诱导产生的NO浓度评价烟叶不同极性部位的抗炎活性。取对数生长期的RAW 264.7细胞，按2
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104个/孔接种于96孔板中，于细胞培养箱中培养12h，弃去上清液，将细胞分为空白对照组、模型组和药物组(乙醇提取物组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组、甲醇组)。模型组加入与药物组DMSO含量相同的溶液，药物组分别加入含相应药物的溶液，每孔100μL，上述药物的质量浓度(终浓度)分别为25.0、50.0、100.0μg/mL，每组设置3个复孔。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.从废弃烟叶中提取抗炎物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将干燥的废弃烟叶粉碎过40目筛，按料液比为1:10加入95％的工业乙醇回流提取3h，重复上述回流提取三次后合并三次提取液，提取液减压浓缩回收乙醇，制得烟叶醇提物浸膏；(2)将烟叶醇提物浸膏加入甲醇直至浸膏完全溶解后用40～80目硅...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏贤坤，李江，孙振春，杨慧，姚励强，刘文霖，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：