载脂蛋白E(APOE)iRNA剂组合物及其使用方法技术

本公开涉及靶向APOE基因的双链核糖核酸(dsRNAi)剂和组合物，以及使用此类dsRNAi剂和组合物抑制APOE基因表达的方法和治疗患有APOE相关神经退行性疾病或病症(例如阿尔茨海默病和帕金森病)的受试者的方法。默病和帕金森病)的受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】549:523)。AD是老年个体痴呆的主要原因，其病理特征包括细胞外淀粉样蛋白β(Aβ)聚集物沉积为淀粉样斑块和细胞内过度磷酸化的tau聚集物作为神经纤维缠结，以及神经元损失和神经胶质活化。由于迟发性AD患者占总AD人群的95％或更多，正在进行各种努力来阐明APOE在AD中的作用。
[0008]更具体地，已经表明具有一个APOE4拷贝的受试者患AD的风险增加了超过3倍，具有两个APOE4拷贝的受试者患AD的风险增加了超过12倍，而两个APOE2拷贝保护受试者免于患上AD(Reiman EM,et al.(2020)Nature Communications 11(1)；667)。此外，已经报道了三个敲除了APOE基因的人类病例，并且这些受试者在医院就诊时(40岁至60岁)均未经历痴呆(Ghiselli,et al.(1981)Science 214(4526):1239；Mak,et al.(2014)JAMA Neurol 71:1228；and Lohse,et al.(1992)J Lipid Res.(11):1583)。在三个病例中的一个(40岁男性)中，MRI和脑脊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制APOE的表达，其中所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中所述有义链包含含有与SEQ ID NO:1的核苷酸序列的一部分或与与SEQ IDNO:1的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少15个连续核苷酸的核苷酸序列，并且所述反义链包含含有与SEQ ID NO:2的核苷酸序列的对应部分或与与SEQ IDNO:2的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少15个连续核苷酸的核苷酸序列，使得所述有义链与所述反义链中的所述至少15个连续核苷酸是互补的。2.如权利要求1所述的dsRNA剂，其中所述dsRNA剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含含有与SEQ ID NO:1的核苷酸序列的一部分或与与SEQ ID NO:1的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，并且所述反义链包含含有与SEQ ID NO:2的核苷酸序列的对应部分或与与SEQ ID NO:2的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，使得所述有义链与所述反义链中的所述至少17个连续核苷酸是互补的。3.如权利要求1所述的dsRNA剂，其中所述dsRNA剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含含有与SEQ ID NO:1的核苷酸序列的一部分或与与SEQ ID NO:1的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少19个连续核苷酸的核苷酸序列，并且所述反义链包含含有与SEQ ID NO:2的核苷酸序列的对应部分或与与SEQ ID NO:2的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少19个连续核苷酸的核苷酸序列，使得所述有义链与所述反义链中的所述至少19个连续核苷酸是互补的。4.如权利要求1所述的dsRNA剂，其中所述dsRNA剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含含有与SEQ ID NO:1的核苷酸序列的一部分或与与SEQ ID NO:1的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少21个连续核苷酸的核苷酸序列，并且所述反义链包含含有与SEQ ID NO:2的核苷酸序列的对应部分或与与SEQ ID NO:2的完整核苷酸序列具有至少90％核苷酸序列一致性的核苷酸序列具有0或1个错配的至少21个连续核苷酸的核苷酸序列，使得所述有义链与所述反义链中的所述至少21个连续核苷酸是互补的。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的dsRNA剂，其中所述有义链和/或所述反义链是选自由表2至表5和表7至表10中的任一表中的任一有义链和反义链组成的组的有义链和/或反义链。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的dsRNA剂，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸57
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79、62
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84、75
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97、86
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108、207
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229、213
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235、218
‑
240、898
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920、1128
‑
1150、637
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659中的任一核苷酸序列相异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO:2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。7.如权利要求1
‑
5中任一项所述的dsRNA剂，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸57
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79、62
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84、207
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229、1128
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1150中的任一核苷酸序列相异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO:2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。
8.如权利要求1
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7中任一项所述的dsRNA剂，其中所述反义链包含与双链体的反义链核苷酸序列中的任一个相异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，所述双链体选自由以下组成的组：AD
‑
1204704、AD
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1204705、AD
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1204705、AD
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1204706、AD
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1204707、AD
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1204708、AD
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1204709、AD
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1204710、AD
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1204711、AD
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1204712和AD
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1204713。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的dsRNA剂，其中所述反义链包含与双链体的反义链核苷酸序列中的任一个相异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，所述双链体选自由以下组成的组：AD
‑
1204704、AD
‑
1204705、AD
‑
1204708和AD
‑
1204712。10.如权利要求1
‑
9中任一项所述的dsRNA剂，其抑制APOE4的表达，但基本上不抑制APOE2的表达和APOE3的表达。11.如权利要求10所述的dsRNA剂，其中所述有义链和/或所述反义链是选自由表7和表8中的任一表中的任一有义链和反义链组成的组的有义链和/或反义链。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的dsRNA剂，其中所述有义链、所述反义链或所述有义链和所述反义链两者与一个或多个亲脂性部分缀合。13.如权利要求12所述的dsRNA剂，其中所述亲脂性部分缀合至所述dsRNA剂的双链区域中的一个或多个位置。14.如权利要求12或13所述的dsRNA剂，其中所述亲脂性部分通过接头或载体缀合。15.如权利要求12
‑
14中任一项所述的dsRNA剂，其中通过logKow测量的所述亲脂部分的亲脂性超过0。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的dsRNA剂，其中通过所述双链RNAi剂的血浆蛋白结合试验中的未结合分数测量出的所述双链RNAi剂的疏水性超过0.2。17.如权利要求16所述的dsRNA剂，其中所述血浆蛋白结合试验是使用人血清白蛋白的电泳迁移率变动试验。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的dsRNA剂，其中所述dsRNA剂包含至少一个经修饰的核苷酸。19.如权利要求18所述的dsRNA剂，其中不超过5个所述有义链核苷酸和不超过5个所述反义链核苷酸是未修饰的核苷酸。20.如权利要求18所述的dsRNA剂，其中所述有义链的所有核苷酸和所述反义链的所有核苷酸均包含修饰。21.如权利要求18
‑
20中任一项所述的dsRNA剂，其中所述经修饰的核苷酸中的至少一个选自以下的组：脱氧核苷酸、3'
‑
末端脱氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'
‑
O
‑
甲基修饰核苷酸、2'
‑
氟基修饰核苷酸、2'
‑
脱氧修饰核苷酸、锁核苷酸、未锁核苷酸、构象限制核苷酸、限制性乙基核苷酸、无碱基核苷酸、2'
‑
氨基修饰核苷酸、2'
‑
O
‑
烯丙基修饰核苷酸、2'
‑
C
‑
烷基修饰核苷酸、2'
‑
羟基修饰核苷酸、2'
‑
甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'
‑
O
‑
烷基修饰核苷酸、吗啉基核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰核苷酸、1,5
‑
脱水己糖醇修饰核苷酸、环己烯基修饰核苷酸、包含5'
‑
硫代磷酸基团的核苷酸、包含5'
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甲基膦酸酯基团的核苷酸、包含5'磷酸的核苷酸或包含5'磷酸模拟物的核苷酸、包含乙烯基膦酸酯的核苷酸、包含腺苷
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二醇核酸(GNA)的核苷酸、包含胸苷
‑
二醇核酸(GNA)S
‑
异构体的核苷酸、包含2
‑
羟甲基
‑
四氢呋喃
‑5‑
磷酸的核苷酸、包含2'
‑
脱氧胸苷
‑
3'磷酸的核苷酸、包含2'
‑
脱氧鸟苷
‑
3'
‑
磷酸的核苷酸或与胆固醇衍生物和十二酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸；及其组
合。22.如权利要求21所述的dsRNA剂，其中所述经修饰的核苷酸选自由以下所组成的组：2'
‑
脱氧
‑
2'
‑
氟基修饰核苷酸、2'
‑
脱氧修饰核苷酸、3'
‑
末端脱氧胸腺嘧啶核苷酸(dT)、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2'
‑
氨基修饰核苷酸、2'
‑
烷基修饰核苷酸、吗啉基核苷酸、氨基磷酸酯或包含非天然碱基的核苷酸。23.如权利要求21所述的dsRNA剂，其中所述经修饰的核苷酸包含3'
‑
末端脱氧胸腺嘧啶核苷酸(dT)的短序列。24.如权利要求21所述的dsRNA剂，其中所述核苷酸上的修饰是2'
‑
O
‑
甲基修饰、GNA修饰和2'氟基修饰。25.如权利要求21所述的dsRNA剂，所述dsRNA剂还包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键。26.如权利要求25所述的dsRNA剂，其中所述dsRNA剂包含6至8个硫代磷酸酯核苷酸间键。27.如权利要求1
‑
26中任一项所述的dsRNA剂，其中每条链的长度不超过30个核苷酸。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的dsRNA剂，其中至少一条链包含至少1个核苷酸的3'突出。29.如权利要求1
‑
27中任一项所述的dsRNA剂，其中至少一条链包含至少2个核苷酸的3'突出。30.如权利要求1
‑
29中任一项所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为15至30个核苷酸对。31.如权利要求30所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为17至23个核苷酸对。32.如权利要求30所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为17至25个核苷酸对。33.如权利要求30所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为23至27个核苷酸对。34.如权利要求30所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为19至21个核苷酸对。35.如权利要求30所述的dsRNA剂，其中所述双链区域的长度为21至23个核苷酸对。36.如权利要求1
‑
35中任一项所述的dsRNA剂，其中每条链具有19至30个核苷酸。37.如权利要求1
‑
35中任一项所述的dsRNA剂，其中每条链具有19至23个核苷酸。38.如权利要求1
‑
35中任一项所述的dsRNA剂，其中每条链具有21至23个核苷酸。39.如权利要求12
‑
38中任一项所述的dsRNA剂，其中一个或多个亲脂性部分缀合至至少一条链上的一个或多个内部位置。40.如权利要求39所述的dsRNA剂，其中所述一个或多个亲脂性部分通过接头或载体缀合至至少一条链上的一个或多个内部位置。41.如权利要求40所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了从所述至少一条链的每端的末端两个位置之外的所有位置。42.如权利要求40所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了从所述至少一条链的每端的末端三个位置之外的所有位置。43.如权利要求40
‑
42所述的dsRNA剂，其中所述内部位置不包括所述有义链的裂解位点区域。44.如权利要求43所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了从所述有义链的5'端起
计数的位置9至12之外的所有位置。45.如权利要求43所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了从所述有义链的3'端起计数的位置11至13之外的所有位置。46.如权利要求40
‑
42所述的dsRNA剂，其中所述内部位置不包括所述反义链的裂解位点区域。47.如权利要求46所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了从所述反义链的5'端起计数的位置12至14之外的所有位置。48.如权利要求40
‑
42中任一项所述的dsRNA剂，其中所述内部位置包括除了所述有义链上的从3'端起计数的位置11至13和所述反义链上的从5'端起计数的位置12至14之外的所有位置。49.如权利要求12
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48中任一项所述的dsRNA剂，其中所述一个或多个亲脂性部分缀合至一个或多个所述内部位置，所述内部位置选自由以下所组成的组：从每条链的5'端起计数的所述有义链上的位置4至8和位置13至18以及所述反义链上的位置6至10和位置15至18。50.如权利要求49所述的dsRNA剂，其中所述一个或多个亲脂部分缀合至一个或多个所述内部位置，所述内部位置选自由以下所组成的组：从每条链的5'端起计数的所述有义链上的位置5、6、7、15和17以及所述反义链上的位置15和17。51.如权利要求13所述的dsRNA剂，其中所述双链区域中的位置不包括所述有义链的裂解位点区域。52.如权利要求12
‑
51中任一项所述的dsRNA剂，其中所述有义链的长度为21个核苷酸，所述反义链的长度为23个核苷酸，并且所述亲脂性部分缀合至所述有义链的位置21、位置20、位置15、位置1、位置7、位置6或位置2，或缀合至所述反义链的位置16。53.如权利要求52所述的dsRNA剂，其中所述亲脂性部分缀合至所述有义链的位置21、位置20、位置15、位置1或位置7。54.如权利要求52所述的dsRNA剂，其中所述亲脂性部分缀合至所述有...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：