一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法技术

本发明专利技术公开了一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法，涉及哺乳动物体细胞克隆技术领域。本发明专利技术提供的载体为猪转录因子LEUTX的体外转录载体，应用该载体可体外获取大量该转录因子LEUTX的mRNA。在猪体细胞克隆胚电激活后5h，通过向克隆胚显微注射LEUTX的mRNA，可以有效增强体细胞克隆胚组蛋白乙酰化H3K27ac这一表观遗传修饰的富集水平，显著促进猪体细胞克隆囊胚的体外发育，胚胎移植后克隆猪的出生率也显著提高。克隆猪的出生率也显著提高。克隆猪的出生率也显著提高。

【技术实现步骤摘要】
一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法


[0001]本专利技术涉及哺乳动物体细胞克隆
，更具体的说是涉及一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法。

技术介绍

[0002]猪体细胞克隆是一项具有巨大商用价值的技术，可应用到构建人类疾病模型、制备人类移植器官、改造猪种品质性状、保存优良种猪资源等方面。但至今猪体细胞克隆效率仍然不高，显著制约着该技术的推广应用。
[0003]目前认为，哺乳动物克隆效率低下的原因之一是克隆胚存在缺陷的基因组激活，已有研究通过使用敲除Xist基因的体细胞或使用去乙酰化酶抑制剂Scriptaid提高了猪的克隆效率，但该方法对猪克隆胚基因组激活的调整作用有限，推测仍有缺失的关键转录因子致使猪克隆胚基因组激活失败。
[0004]因此，一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法，在猪体细胞克隆胚构建完毕后，将转录因子LEUTX mRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体，其特征在于，所述载体为插入有猪LEUTX基因读码框的pcDNA3.1(+)载体；所述猪LEUTX基因读码框的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述猪LEUTX基因末端添加Kozak序列和酶切位点。2.如权利要求1所述的一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体，其特征在于，所述载体用于通过体外转录制备LEUTX mRNA；所述载体包含体外转录实验所必须的T7启动子元件。3.如权利要求2所述的一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体，其特征在于，所述LEUTX mRNA的制备方法为，通过ScaI限制性核酸内切酶进行单酶切得到线性化的载体，再以此为模板通过体外转录实验得到LEUTX mRNA。4.一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的方法，其特征在于，所述方法为显微注射权利要求2制备的LEUTX mRNA，即在猪克隆胚中过表达转录因子LEUTX。5.如权利要求4所述的一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鑫，苗义良，周凯，王婷婷，张霞，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：