一种检测前列腺癌的标志物tRF-Gly-CCC-1-M4及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测前列腺癌的标志物tRF

【技术实现步骤摘要】
一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，尤其涉及一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4及其应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，目前对于前列腺癌细胞增殖检测的方法通常采取血清PSA检测来评判。但在广泛应用的过程中发现此检测方法特异性差与敏感性不足，不能区分前列腺重度炎症及提示早期前列腺癌细胞增殖。虽然还有超声、核磁共振等检测方法作为补充，但这些方法仍具有上述不足之处。因此寻找敏感性高、特异性强的标志物检测前列腺癌细胞增殖，已成为医学研究的热点。
[0003]2016年Nature Genetics杂志报道了tRNA是一种高丰度的、广泛存在的、被动参与的mRNA解码器及蛋白翻译元件。tRNA通过其反密码子与mRNA的密码子结合而显著影响生物学过程和疾病进展。同时，tRNA在体液中高丰度存在的特点使其成为临床应用的生物标志物，可被运用到肿瘤增殖、转移的检测中。2019年Pan Jiang等在Current Medicinal Chemistry杂志上综述报道了tRF和tiRNA是在特定的细胞/组织中或者在细胞受到胁迫等特定条件下，由特定的核酸酶(如Dicer、血管生成素)在tRNA的环上剪切，产生的特定大小的小片段RNA。tRF和tiRNA属于一类小的非编码RNA，被统称为tsRNA。tRF分为tRF
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1，tRF
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2，tRF
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3，tRF
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5和i
‑
tRF；tiRNA分为5
′
tiRNA和3
′
tiRNA。tRF和tiRNA在抑制蛋白质合成、调节基因表达、启动病毒逆转录酶和调节DNA损伤反应中发挥重要作用，是tRNA的功能单位。随着分子生物学的发展，针对tsRNA进行研究有望为前列腺癌的诊断和治疗提供新的途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4及其应用。tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4属于tsRNA，来源于tRNA
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Gly
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CCC
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1，属于tRF
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5c类型。与前列腺正常组织相比，前列腺癌组织细胞中的tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4相对表达含量明显升高。通过检测tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4，可准确的判断前列腺癌的增殖状态，为前列腺癌的诊断提供新的途径。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4，所述标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术还提供了一种检测上述标志物的引物对，所述上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0008]本专利技术还提供了一种上述标志物或上述引物对在制备检测前列腺癌的试剂或试剂盒中的应用。
[0009]优选的，所述试剂或试剂盒的检测样本包括前列腺细胞株、新鲜前列腺组织、穿刺前列腺组织、新鲜尿液、新鲜前列腺按摩液或血液。
[0010]本专利技术还提供了一种检测前列腺癌的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求2所述的
引物对。
[0011]优选的，所述试剂盒中的对照样本为人前列腺增生细胞系。
[0012]本专利技术提供了一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4及其应用。tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4属于tsRNA，来源于tRNA
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Gly
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CCC
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1，由该tRNA 5
’
端第1位至第28位核苷酸组成，由于tRNA序列重合度高，M代表多重比对，M4说明tRF
‑
Gly
‑
CCC
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1片段在tRNA上能比对到4个，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1(GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTC)所示，属于tRF
‑
5c类型。与前列腺正常组织相比，前列腺癌组织细胞中的tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4相对表达含量显著升高。以tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4为标志物，通过检测tRF
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Gly
‑
CCC
‑1‑
M4相对表达含量，可准确的、可靠的检测前列腺癌的增殖状态，能够更好的诊断前列腺癌的发生以及前列腺癌的恶化程度。
附图说明
[0013]图1为实施例1中的检测样本和对照样本中tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4的相对表达含量，其中，Control为对照样本，TEST为检测样本。
具体实施方式
[0014]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0015]实施例1
[0016]本实施例验证了通过检测标志物tRF
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Gly
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CCC
‑1‑
M4来诊断前列腺癌的准确性。具体操作如下：
[0017]1.检测样本RNA的抽提
[0018]2021年10月至2022年1月期间，收集扬州大学附属医院新鲜前列腺组织为检测样本，收集后立即置于
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80℃冰箱中保存。检测时将收集的新鲜前列腺组织取出，室温下解冻后进行RNA的抽提，具体操作如下：
[0019]1.1匀浆样本的制备
[0020]将新鲜前列腺组织研磨后，用蒸馏水溶解，振荡后，于4℃下，7500转/分钟离心5分钟，得到沉淀细胞。按照每克沉淀细胞使用1ml TRI REAGENT试剂(购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司)，加入TRI REAGENT试剂后反复吹打使细胞裂解，得到匀浆样本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Gly
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CCC
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M4，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种检测权利要求1所述标志物的引物对，其特征在于，所述上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种权利要求1所述的标志物或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴艳，王磊，
申请(专利权)人：宜兴市人民医院，
类型：发明
国别省市：