翘嘴鳜X染色体分子标记引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种翘嘴鳜X染色体分子标记引物，其特征是：所述引物为引物对1或引物对2，所述引物对1包括Contig

【技术实现步骤摘要】
翘嘴鳜X染色体分子标记引物及其应用


[0001]本专利技术属于鱼类性染色体组成鉴定
，具体涉及翘嘴鳜X染色体分子标记引物及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，已有多种鱼类的性染色体特异标记被开发出来，如尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)、半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)以及红鳍东方鲀(Takifugurubripes)等，但是这些标记主要是通过微卫星(microsatellite，SSR)、限制位点相关DNA(restriction site associated DNA，RAD)和扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism，AFLP)等分子标记开发技术获得，这些分子标记开发方法耗时长，工作量大，成功率低。而高通量测序技术的出现为分子标记开发提供了一种新的高效手段，目前通过高通量测序的方法已成功开发出乌鳢(Channa argus)及大黄鱼(Larimichthyscrocea)性染色体特异分子标记。
[0003]翘嘴鳜(Sinipercachuatsi)，属于鲈形目(Perciformes)，鳜科(Sinipercidae)，鳜属(Siniperca)，俗称鳜鱼、桂花鱼，其英文名意为中国鲈(Chinese perch)、满洲鱼(Mandarin Fish)。翘嘴鳜为我国特有淡水名贵鱼类，其肉质鲜美，营养丰富，无肌间刺，深受国内外消费者喜爱。在每年的2
‑
5月，国内鳜鱼需求量很大，销售价格高，但是塘内鳜鱼储量少。近年来养殖户为获得更高的利润，选择在越冬期后出售鳜鱼。翘嘴鳜的生长具有性别二态性，在越冬期前的2
‑
9个生长月期间，雌鱼的生长速度快于雄鱼，而在越冬期后的9
‑
14个生长月内，雌鱼达到性成熟并减慢生长速度，此时雄鱼的生长速度快于雌鱼。所以，养殖全雄翘嘴鳜具有极高的经济价值。
[0004]在翘嘴鳜以往的核型分析中，并没有发现明显的性染色体，但通过雌雄基因组的测序和翘嘴鳜雄性特异性分子标记的开发，我们证实在雄鱼基因组中存在Y染色体特异性DNA片段，因此判断鳜鱼性别决定为XX/XY型，即雄性异配。全雄鳜鱼单性育种首先需要获得YY超雄鱼，获得超雄鱼的主要途径是将雌激素诱导得到的伪雌鱼与正常雄鱼交配，从而得到YY超雄鱼后代，理论上超雄鱼在后代中占比25％。其次，将获得的超雄鱼与正常雌鱼交配，从而获得基因型全部为XY的雄鱼子代。传统筛选XY雄鱼与YY超雄鱼的方法是通过测交实验来判断父本的性染色体组成。通过鳜鱼雄性特异性标记验证测交子代的性别需要耗费大量实验成本，且测交亲本单独养殖需要占用较多养殖资源，所以用测交的方法耗时，费力又费资源。迄今为止，国内外尚无能够成功鉴定翘嘴鳜X染色体特异性标记的报道，因此，开发翘嘴鳜X染色体分子标记快速筛选YY超雄鱼对翘嘴鳜全雄育种具有极大的生产应用价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术第一个目的在于提供一种翘嘴鳜X染色体分子标记引物，该引物能在分子
水平上鉴别YY超雄性翘嘴鳜鱼以及XY雄性翘嘴鳜鱼。
[0006]本专利技术第二目的还在于提供一种翘嘴鳜鱼YY超雄鱼鉴定的方法，该方法耗时短，检测结果准确。
[0007]本专利技术第三目的在于提供上述引物或方法在翘嘴鳜鱼全雄育种中的应用。
[0008]为实现上述第一目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]一种翘嘴鳜X染色体分子标记引物，所述引物为引物对1或引物对2，所述引物对1包括Contig
‑
1上游引物和Contig
‑
1下游引物，所述引物对2包括Contig
‑
2上游引物和Contig
‑
2下游引物，其中Contig
‑
1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig
‑
1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig
‑
2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig
‑
2下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0010]具体的，各引物从5
’‑3’
的核苷酸序列如下：
[0011]Contig
‑
1上游引物：5
’‑
ATTCCCATCAACCTGT
‑3’
；
[0012]Contig
‑
1下游引物：5
’‑
CACAATCTGTGCCTAC
‑3’
；
[0013]Contig
‑
2上游引物：5
’‑
TTGCGTTTAGTGTTGATTGT
‑3’
；
[0014]Contig
‑
2下游引物：5
’‑
AGACCTGCACGTCCTAA
‑3’
。
[0015]为实现上述第二目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0016]一种翘嘴鳜鱼YY超雄鱼鉴定的方法，包括以下步骤：
[0017](1)制备翘嘴鳜鱼DNA样品；
[0018](2)以步骤(1)中的DNA样品为模板，采用权利要求1中的引物对1或引物对2进行PCR扩增，扩增反应结束后进行电泳检测，若电泳结果显示扩增产物具有X染色体特异性条带，此时检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为XX雌翘嘴鳜鱼或XY雄翘嘴鳜鱼，若电泳结果显示扩增产物不具有X染色体特异性条带，此时所检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为YY超雄翘嘴鳜鱼。
[0019]在上述翘嘴鳜鱼YY超雄鱼鉴定的方法中：
[0020]优选的，步骤(2)中以步骤(1)中的DNA样品为模板，采用引物对1进行PCR扩增，扩增反应结束后进行电泳检测，若电泳结果显示扩增产物具有约935bp的X染色体特异性条带，此时检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为XX雌翘嘴鳜鱼或XY雄翘嘴鳜鱼，若电泳结果显示扩增产物不具有约935bp的X染色体特异性条带，此时所检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为YY超雄翘嘴鳜鱼。
[0021]优选的，步骤(2)中以步骤(1)中的DNA样品为模板，采用引物对2进行PCR扩增，扩增反应结束后进行电泳检测，若电泳结果显示扩增产物具有约850bp的X染色体特异性条带，此时检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为XX雌翘嘴鳜鱼或XY雄翘嘴鳜鱼，若电泳结果显示扩增产物不具有约850bp的X染色体特异性条带，此时所检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为YY超雄翘嘴鳜鱼。
[0022]优选的，步骤(1)中DNA样品制备采用柱式离心法提取翘嘴鳜鱼DNA。
[0023]优选的，步骤(2)中PCR扩增时，采用20μL PCR反应体系，所述20μL PCR反应体系包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种翘嘴鳜X染色体分子标记引物，其特征是：所述引物为引物对1或引物对2，所述引物对1包括Contig
‑
1上游引物和Contig
‑
1下游引物，所述引物对2包括Contig
‑
2上游引物和Contig
‑
2下游引物，其中Contig
‑
1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig
‑
1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig
‑
2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig
‑
2下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。2.一种翘嘴鳜鱼YY超雄鱼鉴定的方法，其特征是包括以下步骤：(1)制备翘嘴鳜鱼DNA样品；(2)以步骤(1)中的DNA样品为模板，采用权利要求1中的引物对1或引物对2进行PCR扩增，扩增反应结束后进行电泳检测，若电泳结果显示扩增产物具有X染色体特异性条带，此时检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为XX雌翘嘴鳜鱼或XY雄翘嘴鳜...

【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，刘士琰，韩崇，李水生，李桂峰，韩林强，梁健辉，林浩然，
申请(专利权)人：广东梁氏水产种业有限公司，
类型：发明
国别省市：