斑鳢雌性分子标记引物及其应用、鉴别斑鳢性别的方法技术

本发明专利技术属于斑鳢性别鉴定技术领域，具体涉及斑鳢雌性分子标记引物及其应用和鉴别斑鳢性别的方法。本发明专利技术提供的斑鳢雌性分子标记引物，包括引物对BLX1和/或引物对BLX2。本发明专利技术提供的引物对能特异性鉴别斑鳢性别，配合雄性分子标记可对斑鳢超雄鱼YY型和正常雌雄鱼XX型或XY型进行快速准确地鉴定，能够提高斑鳢鱼全雄性或全雌性育种效率。雄性或全雌性育种效率。雄性或全雌性育种效率。

【技术实现步骤摘要】
斑鳢雌性分子标记引物及其应用、鉴别斑鳢性别的方法


[0001]本专利技术属于斑鳢性别鉴定
，具体涉及斑鳢雌性分子标记引物及其应用、鉴别斑鳢性别的方法。

技术介绍

[0002]斑鳢(Channa maculata)属鳢科、鳢属鱼类，为淡水底层鱼类，多栖息于沿岸水草和淤泥底质浅水区。斑鳢是典型的肉食性鱼类，幼鱼主要以桡足类、一些鱼类仔鱼和水生昆虫幼虫等为食，成鱼则以各种小型杂鱼为食，包括鲤鱼和鲮鱼等，人工饲养可以投喂配合饲料，在土塘或者水泥池等进行高密度养殖。斑鳢肉质白嫩、肉味鲜美、肉感爽口、营养丰富，经济价值高。
[0003]研究表明乌鳢和斑鳢均属于XY性别决定型，要规模化生产出全雄斑鳢或全雄斑乌杂交鳢商品苗种，需要构建斑鳢YY繁育系，大量生产YY雄性。而构建斑鳢YY繁育系，需要解决两个关键步骤，第一步是在雌性化诱导子代中将XY生理雌性个体从XX生理雌性中筛选出来，第二步则需要从XY生理雌性与XY雄性后代中将YY雄鱼从XX雌性和XY雄性中筛选出来。尽管此前有雄性Y分子标记开发成功，能够解决第一步面临的问题，筛选出XY生理雌性个体。但在第二步中Y标记无法区分正常XY雄性和YY超雄鱼，而用传统测交的方法既耗时又费力，不适合大规模筛选YY超雄鱼，需要开发稳定可靠的雌性X分子标记筛选，从而筛选其中的YY超雄鱼。迄今为止，国内外虽有能够成功鉴定斑鳢遗传性别的分子标记的报道，但是主要是单核苷酸多态性标记，实际使用比较困难。因此，开发一种简便且能准确鉴定斑鳢是否含X染色体基因的遗传性别的分子标记，在斑鳢全雄育种中具有极大的生产应用价值

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供斑鳢雌性分子标记引物及其应用、鉴别斑鳢性别的方法，在分子水平上鉴别斑鳢性别，筛选出斑鳢YY繁育系超雄鱼，提高检测结果的准确性，提高斑鳢鱼全雄性育种效率。
[0005]本专利技术提供了一种斑鳢雌性分子标记引物，包括引物对BLX1和/或引物对BLX2；
[0006]所述引物对BLX1包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物Contig
‑1‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物Contig
‑1‑
R；
[0007]所述引物对BLX2包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物Contig
‑2‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物Contig
‑2‑
R。
[0008]本专利技术还提供了上述的引物在斑鳢全雄性或全雌性育种中的应用。
[0009]本专利技术还提供了上述的引物在斑鳢性别鉴定中的应用。
[0010]本专利技术还提供了一种斑鳢性别鉴定的方法，包括如下步骤：
[0011]利用上述的引物对待测斑鳢的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行检测；
[0012]当能够扩增出DNA片段时，检测的斑鳢为雌性XX型或者正常雄性XY型；
[0013]当不能扩增出DNA片段时，检测的斑鳢为超雄鱼YY型。
[0014]优选的，所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：斑鳢的基因组DNA 20～50ng，10μM的上游引物和下游引物各0.8μL，2
×
Taq Plus MasterMix II 10μL和余量的ddH2O。
[0015]优选的，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性2min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min，35个循环；72℃终延伸5min。
[0016]优选的，利用质量百分含量为1％的琼脂糖凝胶电泳对所述PCR扩增产物进行检测。
[0017]优选的，当利用引物对BLX1检测PCR扩增时，所述扩增片段的长度为243bp；当利用引物对BLX2检测PCR扩增时，所述扩增片段的长度为628bp。
[0018]优选的，采用柱式离心法提取所述待测斑鳢的基因组DNA。
[0019]本专利技术提供了一种斑鳢雌性分子标记引物，包括引物对BLX1和/或引物对BLX2。本专利技术基于雌雄斑鳢的基因组高通量测序数据设计12对引物，最终筛选出2条特异性鉴别斑鳢性别的雌性分子标记引物对BLX1和引物对BLX2，可对斑鳢超雄鱼YY型和正常雌雄鱼XX型或XY型进行快速准确地鉴定。
[0020]本专利技术利用上述斑鳢雌性分子标记引物中的任意一对引物，只需完成一个简单的PCR扩增反应和琼脂糖凝胶电泳，即可鉴别斑鳢超雄鱼YY型和正常雌雄鱼XX型或XY型，耗时短，效率高，节约资源，有效提高了斑鳢鱼全雄性或全雌性育种效率。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0022]图1为实施例1中X染色体特有片段长度分布情况示意图；
[0023]图2
‑
1和图2
‑
2为实施例1中在正常雌雄个体XX型和XY型样本中检测到扩增片段，在超雄个体YY型样本中未检测到相应扩增片段的12对引物对的PCR产物电泳图；
[0024]图3为实施例2中引物对BLX1的雌性个体XX型、和雄性个体XY型和超雄鱼个体YY型(共48尾，平均每种类型16尾)检测PCR产物电泳图；
[0025]图4为实施例2中引物对BLX2的雌性个体XX型、和雄性个体XY型和超雄鱼个体YY型(共48尾，平均每种类型16尾)检测PCR产物电泳图。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一种斑鳢雌性分子标记引物，包括引物对BLX1和/或引物对BLX2；
[0027]所述引物对BLX1包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物Contig
‑1‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物Contig
‑1‑
R；
[0028]所述引物对BLX2包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物Contig
‑2‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物Contig
‑2‑
R。
[0029]本专利技术各引物的碱基序列，从5
’‑3’
依次如下：
[0030]Contig
‑1‑
F：GCCAAACAGTGTAATAGGTTAG；
[0031]Contig
‑1‑
R：TATGGTCTCTTCTGACATTGG；
[0032]Contig
‑2‑
F：AAGGATAAAACAATGGGTACAC；
[0033]Contig
‑2‑
R：TTGTGCTGACATTGCCTCAG。
[0034]本专利技术所述引物可对斑鳢的X基因进行扩增，其中引物Contig
‑
1的扩增片段的大小为243bp；引物Contig
‑
2的扩增片段的大小为628bp。本专利技术所述引本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种斑鳢雌性分子标记引物，其特征在于，包括引物对BLX1和/或引物对BLX2；所述引物对BLX1包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物Contig
‑1‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物Contig
‑1‑
R；所述引物对BLX2包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物Contig
‑2‑
F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物Contig
‑2‑
R。2.权利要求1所述的引物在斑鳢全雄性或全雌性育种中的应用。3.权利要求1所述的引物在斑鳢性别鉴定中的应用。4.一种斑鳢性别鉴定的方法，其特征在于，包括如下步骤：利用权利要求1所述的引物对待测斑鳢的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行检测；当能够扩增出DNA片段时，检测的斑鳢为雌性XX型或者正常雄性XY型；当不能扩增出DNA片段时，...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩林强，黄景军，梁健辉，吴勇亮，晏书唤，李烨然，林士杰，谢泽文，
申请(专利权)人：广东梁氏水产种业有限公司，
类型：发明
国别省市：