一种利用FXR缺陷型小鼠联合高脂饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种新型非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型制备方法，包括以下步骤：选用SPF级雄性FXR

【技术实现步骤摘要】
一种利用FXR缺陷型小鼠联合高脂饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病模型的方法


[0001]本专利技术涉及一种非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型制备方法。具体可用于NAFLD发生机制及药物研发中，属于医学领域。

技术介绍

[0002]随着全球代谢综合征患病率的不断上升，非酒精性脂肪性肝病患病人数急剧增加，已是全球最常见的肝脏疾病，其全球患病率已达25.24％，包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝硬化、肝癌等，其中，近40％的NAFLD患者可发展为更严重的NASH。在世界不同的地理区域，非酒精性脂肪肝的患病率有很大的差异，其中在中东和南美洲的NAFLD患病率最高。在美国，多达8000万人患有NAFLD。然而目前NAFLD的发病机制仍不清楚，发现与糖尿病、肥胖、年龄、种族、性别和基因多态性等危险因素相关。迄今为止临床上缺乏有效的NAFLD治疗药物。因此，建立一种更加符合临床病理特征的小鼠NAFLD模型迫在眉睫。
[0003]目前的模型并不能完全模拟临床上NAFLD的病理生理特征，NAFLD小鼠模型常见的有如ob/ob基因改造的模型，蛋氨酸/胆碱缺乏(MCD)饮食模型，高脂饮食(HFD)或者其他高热量食物(FD)诱导的模型，这类以饮食模型为主的单因素模型广泛被用作该疾病的实验模型。虽然这些模型已经被用于模拟临床上的NAFLD病人特征，但很少能完全复制人类疾病的所有代谢、组织学和遗传特征，即模拟所得的结果与临床上不完全一致，比如小鼠体重减轻，或者不能完全发展为严重脂肪性肝炎和晚期纤维化等。因此，寻找到新的动物模型对于研究NAFLD发病机制是具有重要意义的。
[0004]本文特别采用以C57BL/6为背景的FXR
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基因敲除鼠作为主要的研究对象，FXR调控脂质代谢，FXR敲除会引起脂肪变性，这是脂肪肝发展进程中一个重要指标，而高脂饮食为进一步探讨NAFLD的发病机制提供了一种可靠的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是：提供一种利用FXR
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小鼠联合饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病模型，它在制备动物模型的同时，能有效缩短造模时间，节约造模成本，更能模拟人类NAFLD病理生理特征。
[0006]为了解决以上技术问题，本专利技术的方案如下：一种利用FXR
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小鼠联合饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病模型的方法，包含以下步骤：
[0007]采用雄性8～10周龄SPF级雄性FXR
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和C57BL/6小鼠，在洁净环境中饲养；随机分成四组，其中FXR
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小鼠两组，命名为FXR
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Ctr和FXR
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HF/HC/BS，C57BL/6小鼠两组，命名为WT
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Ctr和WT
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HF/HC/BS。15周后麻醉采血并处死，检测血清生化指标；取出完整的肝脏拍照并称重，留取一部分肝组织用于后续Real
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Time PCR相关检测，另取一部分肝组织做冰冻、石蜡切片，分别进行油红O、H&E、免疫组织化学和天狼星红染色，判定NAFLD模型效果与质量。
[0008]所述的高脂饲料，其配方按质量比包括30％
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60％脂肪，0.5％
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1.5％胆固醇,0.2％
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1％胆酸，其余成分为小鼠基础饮食饲料。
[0009]所述的小鼠基础饮食饲料可以为本领域所有公知常用的小鼠基础饮食饲料。
[0010]所述的高脂饲料用于构建非酒精性脂肪肝动物模型。
[0011]所述的小鼠在动物房内饲养，室内温度保持在22
±
3℃，保证环境清洁空气流通。
[0012]所有小鼠自由采食高脂饲料或对照饲料(即小鼠基础饮食饲料)。
[0013]FXR
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小鼠经高脂饲料饲养15周，得到非酒精性脂肪性肝病动物模型。
[0014]所述方法进一步是随机选取同批次FXR
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或C57BL/6小鼠作为对照动物，自由采食正常饲料。
[0015]本专利技术具有以下优点和积极效果：
[0016]本专利技术特点采用以C57BL/6为背景的FXR
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基因敲除小鼠，经高脂饮食诱导发展形成非酒精性脂肪性肝病模型。FXR能调控脂质、炎症或纤维化等代谢通路，FXR敲除能引起脂肪变性。C57BL/6小鼠在本专利技术中作为对照使用。本专利技术方法中的动物饲料为对照饲料(Ctr)和高脂饲料(HF/HC/BS)分别购于北京科奥协力饲料有限公司和睿迪生物科技有限公司制备。本专利技术方法中的SPF级雄性FXR
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小鼠为本实验室饲养繁殖，SPF级雄性C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0017]1.本专利技术所述的高脂饲料配方简单，可在短周期内造出重度NAFLD模型，易于控制，构建的动物模型成功率高，可重复性高，有良好的应用前景。
[0018]2.本专利技术所构建的动物模型可用于基因与饮食在非酒精性脂肪性肝病的发病机制中的相互作用，对药物研发都有重要意义。
[0019]3.本专利技术所构建的NAFLD小鼠的病理生理特征最接近人类。
附图说明
[0020]图1为四组小鼠肝脏表观图；
[0021]图2为四组小鼠血清相关检测结果；
[0022]图3为四组小鼠肝脏炎症相关Real
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Time PCR检测结果；
[0023]图4四组小鼠肝脏纤维化相关Real
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Time PCR检测结果；
[0024]图5为四组小鼠肝脏油红染色观察结果(X 100)；
[0025]图6为四组小鼠肝脏HE染色观察结果(X 200)；
[0026]图7为四组小鼠肝脏CD68肝脏免疫组织化学染色结果(X 200)；
[0027]图8为四组小鼠肝脏天狼星红染色观察结果(X 200)；
具体实施方式
[0028]为了证明该种非酒精性脂肪性肝病模型小鼠的造模方法的有效性，因此进行了以下实验：
[0029]选取雄性FXR
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和C57BL/6小鼠分别随机分为高脂组和对照组。高脂组小鼠经适应性饲养1周后，自由采食高脂饲料，连续饲养15周。对照组小鼠则供给对照饲料，连续15周。留取血液作相关生化分析，留取小鼠肝组织做Real
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Time PCR检测和病理学检查。
[0030]在动物房内饲养，室内温度保持在22
±
3℃，保证环境清洁空气流通。
[0031本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用FXR缺陷型小鼠联合高脂饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病小鼠模型。2.根据权利要求1所述的利用FXR缺陷型小鼠联合高脂饮食诱导建立非酒精性脂肪性肝病小鼠模型，其特征在于，所述高脂饲料配方包含：30％
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60％脂肪，0.5％
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1.5％胆固醇,0.2％
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【专利技术属性】
技术研发人员：周云，李惟国，郑鑫，徐慧敏，
申请(专利权)人：鹤壁市人民医院，
类型：发明
国别省市：