过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用制造技术

本申请提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用，稀释剂包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚

【技术实现步骤摘要】
过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用


[0001]本申请涉及生物
，特别是涉及一种过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用。

技术介绍

[0002]化学发光免疫分析技术(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)是将化学反应发光和抗原抗体间特异性反应相结合的定量免疫检测技术。因其具有线性范围宽、灵敏度高、特异性强等诸多优点，目前已成为免疫分析技术的主流方法。免疫分析法检测的高灵敏性和高准确性建立在良好的信噪比(特异性结合的目标检测物信号值与非特异吸附产生的本底信号值之比)的基础上。
[0003]在化学发光免疫分析技术中，将辣根过氧化物酶与抗体偶联形成过氧化物酶偶联物，然后进行酶促化学发光的方法应用最为广泛。其中，过氧化物酶偶联物通常制备为高浓度储存液，再通过稀释剂稀释成即用型工作浓度(1:10至1:100)。然而，传统的过氧化物酶偶联物的稀释剂易造成化学发光信号的本底值过高，信噪比偏低等问题。因此，在保持酶活性和蛋白稳定性的情况下，如何提高信噪比，进而提高检测灵敏度和准确性，是目前的难题。

技术实现思路

[0004]基于此，本申请提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，该稀释剂能够维持样本稳定性、提高信噪比。
[0005]此外，还提供了一种上述过氧化物酶偶联物的稀释剂的应用。
[0006]根据本申请的一个方面，提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚
‑
1、聚氧乙烯脂肪醇醚
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4和聚氧乙烯脂肪醇醚
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5中的一种或多种；所述促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；所述表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；所述碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；所述惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。
[0007]在其中一个实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.03w/v％～0.08w/v％；和/或，
[0008]所述基础缓冲液的溶质的浓度为25mmol/L～50mmol/L。
[0009]在其中一个实施例中，所述稀释剂的pH值为6.0～7.0。
[0010]在其中一个实施例中，所述基础缓冲液选自如下缓冲液中的一种或多种：HEPES缓冲液、MOPS缓冲液和PBS缓冲液。
[0011]在其中一个实施例中，所述促凝剂选自聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或多种。
[0012]在其中一个实施例中，所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚
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1、聚氧乙烯脂肪醇醚
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4和聚氧乙烯脂肪醇醚
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5中的一种或多种。
[0013]在其中一个实施例中，所述碱金属氯化物选自氯化钠和氯化钙中的一种或多种。
[0014]在其中一个实施例中，所述惰性蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白和马血清白蛋白中的一种或多种。
[0015]在其中一个实施例中，所述稀释剂还包括防腐剂，所述防腐剂选自叠氮钠和ProClin300中的一种或多种。
[0016]根据本申请的另一方面，提供了一种化学发光免疫分析方法，采用上述的过氧化物酶偶联物的稀释剂稀释过氧化物酶偶联物后进行化学发光免疫分析。
[0017]与现有技术相比，本申请具有如下有益效果：
[0018]本申请的过氧化物酶偶联物的稀释剂能够使稀释后的样品在保持酶活性和蛋白稳定性不变的情况下，降低化学发光免疫分析检测过程中的本底信号值、从而提高各检测指标的信噪比，并提高化学发光免疫分析技术的灵敏度和准确性。
附图说明
[0019]图1为实施例1的稀释剂用于化学发光免疫分析检测的信噪比；
[0020]图2为实施例4中不同种类的表面活性剂用于化学发光免疫分析检测的信噪比；
[0021]图3为实施例5中不同浓度的表面活性剂用于化学发光免疫分析检测的本底信号值。
具体实施方式
[0022]为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
[0023]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0024]“惰性蛋白”是指在反应体系中不具有生物活性(酶活性、抗原抗体反应等)，仅起到提高蛋白浓度、减少非特异性结合等作用，与活性蛋白质意义相反。
[0025]本申请提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，该稀释剂包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；其中，表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚
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1、聚氧乙烯脂肪醇醚
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4和聚氧乙烯脂肪醇醚
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5中的一种或多种；促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。
[0026]表面活性剂能够对非特异性吸附进行洗脱、降低蛋白间的疏水作用，提高特异性识别能力。在其中一些实施方式中，表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚
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1、聚氧乙烯脂肪醇醚
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4和聚氧乙烯脂肪醇醚
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5中的一种或多种。表面活性剂具有复性抗原的作用，有很强的对非特异性吸附的洗脱作用，同样可以降低蛋白间的疏水作用，提高特异性的识别能力。本申请的专利技术人通过研究发现，随着表面活性剂的浓度升高，本底信号值下降；然而当表明活性剂浓度过高时，目标检测物的信号值也会降低。因此，控制表明活性剂的浓度为0.02w/
v％～0.5w/v％，既能够有效地降低本底信号值，又不会影响目标检测物的信号值。在一些可选地具体示例中，表面活性剂的浓度为0.02w/v％、0.05w/v％、0.1w/v％、0.2w/v％或0.5w/v％。
[0027]在其中一些实施方式中，表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.2w/v％。
[0028]进一步地，表面活性剂的浓度为0.03w/v％～0.08w/v％。当表面活性剂的浓度达到0.03w/v％～0.08w/v％后，继续增加浓度，本底信号值下降幅度不明显。更进一步地，表面活性剂的浓度为0.05w/v％。
[0029]基础缓冲液能够使稀释剂在长期保存过程中保持稳定、不易沉降；适量的促凝剂有利于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚
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1、聚氧乙烯脂肪醇醚
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4和聚氧乙烯脂肪醇醚
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5中的一种或多种；所述促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；所述表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；所述碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；所述惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。2.根据权利要求1所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.03w/v％～0.08w/v％；和/或，所述基础缓冲液的溶质的浓度为25mmol/L～50mmol/L。3.根据权利要求1所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述稀释剂的pH值为6.0～7.0。4.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述基础缓冲液选自如下缓冲液中的一种或多种：HEPES缓冲液、MOPS缓冲液和PBS缓冲液。5.根据权利要求1～3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁俊杰，孙正华，潘维华，吉琛，施启尧，
申请(专利权)人：江苏三联生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：