【技术实现步骤摘要】
一种基因检测分子及应用
[0001]本专利技术属于核酸检测领域,具体涉及一种核酸分子信标及其应用。
技术介绍
[0002]在基础研究以及临床实践中,核酸检测具有广泛的应用,尤其在病原体检测中发挥了重要的作用。聚合酶链式扩增(PCR)是目前主流的病原体核酸检测技术,具有极高的检测特异性和灵敏度。但由于PCR方案对检测环境、设备、人员的要求较高,其在临床上的应用也受到了一定程度的限制。
[0003]分子信标(Molecular beacon)是另一项具有临床应用潜力的核酸检测技术,是以碱基互补配对原则、荧光共振能量转移原理为基础独立发展起来的一项核酸检测技术。分子信标是一个能形成“茎环结构”的单链寡聚核苷酸分子,长度一般为25
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35个核苷酸,其一端被荧光基团标记,另一端被荧光淬灭基团标记。分子信标的5
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端、3
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端邻近核酸序列互补,能形成双链的“茎状区域”,使荧光基团和淬灭基团相互靠近。基于荧光共振能量转移原理,荧光基团发出的荧光几乎完全被淬灭基团吸收,并以热的形式散发出去,这使得以“茎环结构”形态存在的分子信标的荧光本底值极低。当“茎环结构”被破坏后,荧光基团与淬灭基团分离,不再发生荧光能量共振转移现象,使得荧光信号的检测值升高,且荧光信号的强度与被破坏的“茎环结构”的量成正比。
[0004]自分子信标技术建立以来,在实时定量PCR、基因突变分析、病原体检测等多个方面得到了应用。理想状态下,该技术的检测特异性依赖于信标分子的“环状区域”序列与被检 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有茎环结构的寡聚核苷酸分子信标,其特征在于,所述信标分子中至少一个核苷酸为核糖核苷酸,其他的核苷酸为脱氧核糖核苷酸;所述信标分子的两个末端分别被荧光基团和荧光淬灭基团标记。2.一种用于体外核酸分子检测的检测组合物,其特征在于,所述检测组合物含有至少一种权利要求1所述的分子信标和至少一种具有RNase H2蛋白活性的蛋白质。3.权利要求2所述的检测组合物,其特征在于,所述具有RNase H2蛋白活性的蛋白质为热稳定性蛋白质;优选的,所述具有RNase H2蛋白活性的蛋白质为来源于Pyrococcus abyssi嗜热菌的RNase H2蛋白,以及上述蛋白的一个或多个氨基酸残基被取代、添加、缺失而形成的衍生蛋白质、上述蛋白的融合蛋白、以及为适应表达而对上述蛋白或其衍生蛋白进行密码子优化形成的衍生蛋白。4.一种在体外样本中进行基因检测的方法,包括以下步骤:1)提供权利要求2所述的检测组合物和含有至少一种被检测核酸分子的检测样本,所述检测组合物含有至少一种权利要求1所述的分子信标、至少一种具有RNase H2蛋白活性的蛋白质;所述分子信标能够与被检测核酸分子中具有序列同源性的目标核酸序列杂交;2)提供合适的反应条件,将检测组合物与检测样本进行接触,使分子信标与序列同源的目标核酸序列杂交;3)将反应体系置于40
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90℃条件下进行孵育,使具有RNase H2蛋白活性的蛋白质切割与目标核酸序列杂交的分子信标;4)检测被切割的分子信标的量。5.一种在体外样本中进行基因检测的方法,包括以下步骤:1)提供权利要求2所述的检测组合物和含有至少一种被检测核酸分子的检测样本,所述检测组合物含有至少一种权利要求1所述的分子信标、至少一种具有RNase H2蛋白活性的蛋白质;所述分子信标能够与被检测核酸分子中具有序列同源性的目标核酸序列杂交;2)提供合适的反应条件,使检测样本中的被检测核酸分子、或包含目标核酸序列的核酸片段进行等温扩增,获得等温扩增产物;3)提供合适的反应条件,将检测组合物与步骤2获得的等温扩增产物进行接触,使分子信标与序列同源的目标核酸序列杂交;4)将反应体系置于40
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90℃条件下进行孵育,使具有RNase H2蛋白活性的蛋白质切割与目标核酸序列杂交的分子信标;5)检测被切割的分子信标的量。6.一种在体外样本中进行基因检测的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)提供权利要求2所述的检测组合物和含有至少一种被检测核酸分子的检测样本,所述检测组合物含有两种或两种以上的权利要求1所述的分子信标、至少一种具有RNase H2蛋白活性的蛋白质;所述两种或两种以上的分子信标分别被可区分的荧光基团标记;所述两种或两种以上的分子信标能够分别与被检测核酸分子中具有序列同源性的目标核酸序列杂交;2)提供合适的反应条件,将检测组合物与检测样本进行接触,使分子信标分别与序列同源的目标核酸序列杂交;3)将反应体系置于40
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90℃条件下进行孵育,使具有RNase H2蛋白活性的蛋白质切割
与目标核酸序列杂交的分子信标;4)利用与...
【专利技术属性】
技术研发人员:请求不公布姓名,
申请(专利权)人:枣庄康泽生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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