靶核酸的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种靶核酸的检测方法，其包含：将由靶核酸、第一核酸和第二核酸形成的第一开裂结构的第一侧翼切断的步骤；将由第三核酸、被切断的第一侧翼和第四核酸形成的第二开裂结构的第二侧翼切断的步骤；通过检测被切断的第二侧翼来检测靶核酸的存在的步骤；其中，将第一侧翼切断的步骤及将第二侧翼切断的步骤通过用侧翼核酸内切酶将第一侧翼和第二侧翼切断来进行，侧翼核酸内切酶具有与选自由属于热球菌目的细菌和属于甲烷杆菌目的细菌组成的组中的细菌的侧翼核酸内切酶的氨基酸序列具有65％以上的序列同源性的氨基酸序列。列具有65％以上的序列同源性的氨基酸序列。列具有65％以上的序列同源性的氨基酸序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶核酸的检测方法


[0001]本专利技术涉及靶核酸的检测方法。

技术介绍

[0002]已知有基于靶核酸的检测的各种诊断方法。作为这样的诊断方法，例如有基于单核苷酸多态性(SNP)分析的体质诊断、基于体细胞突变分析的药剂(例如抗癌剂)的效果和副作用的预测诊断、基于病毒的DNA或RNA的检测的感染症的诊断等。在这些诊断用途中，靶核酸的存在比较低的情况较多，因此需要能够高精度地对靶核酸进行定量分析的方法。作为高精度地对靶核酸进行定量分析的方法，例如已知利用了数字测量的方法。
[0003]数字测量是如下的定量方法：将靶核酸等生物分子以概率达到1分子以下的方式稀释，分配给多个微小的反应容器，对各反应容器进行2值化(有/无伴随检测反应的信号)，由此对检测对象是否进入反应容器进行计数。在数字测量中，还能够检测1分子的生物分子，能够进行高精度的定量测定。例如，非专利文献1中公开了将ICA(Invasive Cleavage Assay，侵入裂解分析)法与数字测量组合而成的靶核酸的检测方法。
[0004]现有技术文献
[0005]非专利文本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种靶核酸的检测方法，其包含：将由靶核酸、第一核酸和第二核酸形成的第一开裂结构的第一侧翼切断的步骤；将由第三核酸、被切断的第一侧翼和第四核酸形成的第二开裂结构的第二侧翼切断的步骤；以及通过检测被切断的第二侧翼来检测靶核酸的存在的步骤；其中，将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤通过用侧翼核酸内切酶将所述第一侧翼和所述第二侧翼切断来进行，所述侧翼核酸内切酶具有与选自由属于热球菌目(Thermococcales)的细菌和属于甲烷杆菌目(Methanobacteriales)的细菌组成的组中的细菌的侧翼核酸内切酶的氨基酸序列具有65％以上的序列同源性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述侧翼核酸内切酶具有与选自由嗜热古生菌(Thermococcus kodakar ensis)KOD1株、深海热球菌(Pyrococcus abyssi)GE5株、以及热自养甲烷嗜热杆菌(Methanothermobacter Thermautotrophicus)Delta H株组成的组中的细菌的侧翼核酸内切酶的氨基酸序列具有65％以上的序列同源性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述靶核酸是DNA。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在pH为7.5以上且9.0以下的条件下进行。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在温度为55℃以上且70℃以下的条件下进行。6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，将所述第一侧翼切断的步骤及将所述第二侧翼切断的步骤在水性溶剂中进行，所述水性溶剂含有Mg
2+
。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述水性溶剂中的Mg
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【专利技术属性】
技术研发人员：牧野洋一，石野良纯，石野园子，
申请(专利权)人：国立大学法人九州大学，
类型：发明
国别省市：