用于生成纳米抗体的快速单步梯度法制造技术

公开了一种用于快速生成针对任何抗原的纳米抗体(VHH)的快速单步梯度方法，其中该方法包括通过以下步骤从纳米抗体表达文库中分离针对特定抗原的纳米抗体：(a)将目的抗原结合由允许蛋白质结合的聚合物制成的珠粒上；(b)将表达文库的微生物与步骤(a)中的珠粒一起温育；(c)将步骤(b)中的珠粒放在具有密度大于或等于1g/mL的惰性介质的管上，并以150

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生成纳米抗体的快速单步梯度法


[0001]本专利技术涉及用于快速分离针对任何抗原的纳米抗体的新的一步快速梯度法。
现有技术
[0002]一些天然存在的抗体缺乏轻链，称为单域抗体(HCAb)。它们来源于IgG，并且被发现遍布于骆驼科。骆驼科包括骆驼、单峰骆驼、美洲驼、骆马原驼(guanaco)和羊驼。HCAb的抗原结合片段包含由3个高变区(CDR)组成的单可变VHH结构域。被分离后，VHH结构域也称为纳米抗体。来源于骆驼科HCAb的靶向特异性纳米抗体是在用抗原加佐剂免疫后获得的。我们的平台开发了一种改进的程序，用于通过使用羊驼作为供体物种获得纳米抗体。
[0003]为了分离免疫后产生的靶向特异性纳米抗体的基因序列，我们必须首先分离外周B细胞以获得总RNA，然后进行cDNA制备以最终扩增纳米抗体区。编码纳米抗体的cDNA片段短至360nt，并且从免疫的羊驼的120ml血液中可以获得多达～3x106个个体克隆。细菌或酵母可视化系统用于克隆各种完整的个体纳米抗体，产生称为的纳米抗体或VHH文库。
[0004]微生物展示技术允许纳米抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
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一种从纳米抗体表达文库中分离针对特定抗原的纳米抗体(VHH)的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)将目的抗原结合由结合蛋白质的聚合物制成的珠粒(b)将所述表达文库的微生物与步骤(a)的所述珠粒温育，其中所述表达文库对应于用对应于先前用所述目的抗原免疫的产生VHH的动物的VHH结构域的cDNA片段，或合成文库转化的微生物；(c)将步骤(b)的所述珠粒放入具有密度大于或等于1g/mL的惰性介质的管中，并以150至250g之间的速率离心45s至2分钟；d)将具有游离微生物的上层部分和上清液丢弃，并且获得带有连接的微生物的珠粒，所述微生物对应于表达识别抗原的VHH的那些微生物。2.
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根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述珠粒是琼脂糖、纤维素、胶乳、琼脂糖或镍并且被修饰以结合蛋白质。3.
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根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述珠粒中具有大于在(c)中使用的所述介质的密度。3.
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根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中所述惰性介质是反应性Ficol、percol或蔗糖。4.
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【专利技术属性】
技术研发人员：亚历杭德罗，
申请(专利权)人：智利南方大学，
类型：发明
国别省市：