一种基因-化疗纳米药物共递送系统、其制备方法和用途技术方案

本发明专利技术提供了一种基因

【技术实现步骤摘要】
一种基因
‑
化疗纳米药物共递送系统、其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种基因
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化疗纳米药物共递送系统、其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]上皮性卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，历来被称为“沉默的杀手”。尽管多西紫杉醇是卵巢癌的一线化疗药物之一，但单独的常规治疗并不能令人满意地改善患者的总体生存结果。近年来研究表明，表观遗传调控可能在卵巢癌的起因和发展过程具有重要作用。N6‑
甲基腺苷(m6A)是所有高等真核信使RNA中最普遍的转录后修饰，通过调节RNA加工、定位、翻译和最终衰变来调节基因表达的结果。现有研究表明，m6A识别蛋白YTHDF1在卵巢癌中异常上调，会通过作用于EIF3C蛋白质翻译并随后调节癌症进展来发挥关键的致癌作用，证明了YTHDF1作为癌症治疗靶点的潜在价值。因此，靶向m6A调节剂的RNA干扰疗法有望成为一种新兴的癌症疗法，利用siRNA等手段的基因治疗方法敲降YTHDF1的表达而抑制肿瘤进程。然而，未经修饰的裸siRNA分子在血流中不稳定，可能具有免疫原性，并且不容易跨越细胞膜进入细胞。因此，具有增强的安全性和递送效率以实现m6A调节剂抑制作用的递送系统尤为重要。目前常见的siRNA药物载体(主要包括病毒、聚合物纳米颗粒、无机纳米颗粒以及脂质体等)存在肿瘤靶向能力低、利用率低、系统毒性和免疫原性高等特点，限制了其临床应用。此外，卵巢癌现有的化疗药物多西紫杉醇的系统毒性和副作用较大，并且游离的化疗药物的生物利用率较低。通过合适的载体包载可以降低全身毒性、提高利用率、提高肿瘤杀伤作用。因此，利用合适的药物载体共同包载递送能够敲降YTHDF1表达的基因药物及化疗药物多西紫杉醇到达卵巢癌细胞具有重要意义。
[0003]小细胞外囊泡是细胞产生的一种具有磷脂双分子层结构的纳米级囊泡，它具有良好的入胞能力和生物相容性。利用小细胞外囊泡作为共递送载体，可以实现药物联合治疗并防止基因药物降解和提高化疗药物的抗肿瘤效果。因此，利用小细胞外囊泡同时封装可以敲降YTHDF1表达的基因药物siYTHDF1和用于卵巢癌治疗的化疗药物多西紫杉醇，可以将二者有效地递送到卵巢癌细胞中，靶向并调控卵巢癌中的表观遗传调控因子，并且结合化疗抗肿瘤药效来实现高效的卵巢癌治疗策略。目前尚未有研究将基于小细胞外囊泡的纳米载药技术与共递送m6A表观遗传调控方式和化疗药物相结合来实现对卵巢癌的治疗。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种基因
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化疗纳米药物共递送系统、其制备方法和应用。本专利技术中的纳米药物共递送平台结合了基因治疗和化学疗法，提供了一种在肿瘤治疗中应用m6A表观遗传调控的方法，可解决相关的低肿瘤靶向性和给药效率等问题，并且封装其中的化疗药物多西紫杉醇没有明显表现出化疗诱导的全身毒性。该共递送系统显示出比单一疗法更好的治疗效果，具有临床应用潜力。
[0005]在阐述本专利技术之前，定义本文所使用的术语如下：
[0006]术语“MsEV”是指人骨髓间充质干细胞来源的小细胞外囊泡。
[0007]术语“DTX”是指多西紫杉醇。
[0008]术语“siRNA”是指小干扰RNA。
[0009]术语“MsEV
‑
siYTHDF1”是指包载siYTHDF1的小细胞外囊泡。
[0010]术语“MsEV
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DTX”是指包载DTX的小细胞外囊泡。
[0011]术语“MsEV
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siNC”是指包载siYTHDF1的阴性对照(Negative Control)siRNA的小细胞外囊泡。
[0012]术语“MsEV
‑
siNC
‑
DTX”是指共包载siYTHDF1的阴性对照(Negative Control)siRNA和多西紫杉醇的小细胞外囊泡。
[0013]术语“MsEV
‑
siYTHDF1
‑
DTX”是指共包载siYTHDF1和DTX的小细胞外囊泡。
[0014]术语“siYTHDF1”是指能够敲降YTHDF1蛋白表达的siRNA。
[0015]术语“m6A”是指N6‑
甲基腺嘌呤核苷酸甲基化。
[0016]术语“YTHDF1”是指一种已知m6A RNA甲基化识别蛋白，亦称为YTH结构域N6‑
甲基腺嘌呤(m6A)核苷酸结合蛋白1。
[0017]术语“siNC”是指siYTHDF1的阴性对照(Negative Control)siRNA，序列为5
’‑
AACGAGCCATAACGAAAGG
‑3’
。
[0018]术语“Optiprep”是一种分离液。
[0019]术语“PBS”是指磷酸盐缓冲溶液。
[0020]术语“DAPI”是指4
’
,6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚。
[0021]为实现上述目的，本专利技术的第一方面提供了一种基因
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化疗纳米药物共递送系统，所述基因
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化疗纳米药物共递送系统包括由小细胞外囊泡、基因药物和化疗药物组成的纳米颗粒，所述基因药物和化疗药物被包载到小细胞外囊泡中；其中，
[0022]所述基因
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化疗纳米药物共递送系统中纳米颗粒的粒径为100nm～250nm，优选为120nm～230nm；更优选为140nm～200nm。
[0023]根据本专利技术第一方面的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其中，
[0024]所述小细胞外囊泡的来源为正常组织细胞，优选选自以下一种或多种：巨噬细胞、DC细胞、间充质干细胞，更优选为间充质干细胞，最优选为人骨髓间充质干细胞；
[0025]所述基因药物为siRNA，优选为能够敲降m6A识别蛋白YTHDF1表达的RNA序列siYTHDF1；和/或
[0026]所述化疗药物为卵巢癌临床用药，优选选自以下一种或多种：金属铂类、蒽环类、紫杉烷类，更优选为紫杉烷类，最优选为多西紫杉醇。
[0027]根据本专利技术第一方面的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其中，所述siYTHDF1的序列选自以下一种或多种：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，最优选为SEQ ID NO.1。
[0028]根据本专利技术第一方面的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其中，所述基因药物、所述化疗药物和所述小细胞外囊泡投料的质量比为0.1～5:0.01～1:0.5～10，优选为0.5～1.5:0.05～0.4:0.5～4，最优选为1:1:0.1。
[0029]本专利技术的第二方面提供了制备第一方面所述的基因
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化疗纳米药物共递送系统的方法，所述制备方法包括以下步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因
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化疗纳米药物共递送系统，其特征在于，所述基因
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化疗纳米药物共递送系统包括由小细胞外囊泡、基因药物和化疗药物组成的纳米颗粒，所述基因药物和化疗药物被包载到小细胞外囊泡中；其中，所述基因
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化疗纳米药物共递送系统中纳米颗粒的粒径为100nm～250nm，优选为120nm～230nm；更优选为140nm～200nm。2.根据权利要求1所述的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其特征在于：所述小细胞外囊泡的来源为正常组织细胞，优选选自以下一种或多种：巨噬细胞、DC细胞、间充质干细胞，更优选为间充质干细胞，最优选为人骨髓间充质干细胞；所述基因药物为siRNA，优选为能够敲降m6A识别蛋白YTHDF1表达的RNA序列siYTHDF1；和/或所述化疗药物为卵巢癌临床用药，优选选自以下一种或多种：金属铂类、蒽环类、紫杉烷类，更优选为紫杉烷类，最优选为多西紫杉醇。3.根据权利要求1或2所述的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其特征在于，所述siYTHDF1的序列选自以下一种或多种：SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3，最优选为SEQ ID NO.1。4.根据权利要求1至3中任一项所述的基因
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化疗纳米药物共递送系统，其特征在于：所述基因药物、所述化疗药物和所述小细胞外囊泡投料的质量比为0.1～5:0.01～1:0.5～10，优选为0.5～1.5:0.05～0.4:0.5～4，最优选为1:1:0.1。5.制备权利要求1至4中任一项所述的基因
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化疗纳米药物共递送系统的方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)制备小细胞外囊泡；(2)将基因药物和化疗药物包载到步骤(1)制备的小细胞外囊泡中得到所述基因
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化疗纳米药物共递送系统。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中还包括以下步骤：培养基培养并收集细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨延莲，杜蓉，朱凌，王琛，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：