一种枯草芽孢杆菌2-22及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌2

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌2
‑
22及其应用


[0001]本专利技术涉及农业微生物菌剂及其应用
，更具体的说是涉及一种枯草芽孢杆菌2
‑
22及其应用。

技术介绍

[0002]生物固氮是自然生态系统中氮的主要来源。生物固氮包括共生、联合和自生固氮3种类型，自身固氮菌可以将空气中的氮转化为植物可以吸收利用的氨，自生固氮对于满足植物的高氮需求和平衡氮素损失极其重要。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是自生固氮菌的一种，并且枯草芽孢杆菌也是目前应用最为广泛的植物促生菌之一，可以产生多种植物激素，如植物生长素(吲哚乙酸)、细胞分裂素、赤霉素等。芽孢杆菌可以产生芽孢，具有耐旱、耐盐碱、耐辐射等优点，而且产品易生产、储存时间长，因此广泛应用于农药和肥料领域，为实现环保、无污染和高效农业生产提供了有效的方法和解决途径。因此筛选具有固氮酶活性，又能高产吲哚乙酸和赤霉素的菌株用作微生物肥料对于环境保护、农业可持续发展等均具有重要意义。
[0003]CN114015625A公开了一种蜡样芽孢杆菌P30，吲哚乙酸浓度为61.57～100.75mg/L，赤霉素含量为19.60～57.20mg/L，但目前并没有关于具有固氮酶活性并且同时能高产吲哚乙酸和赤霉素的枯草芽孢杆菌的相关报道。
[0004]因此，能否提供一种具体的枯草芽孢杆菌克服上述技术障碍是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌2
‑/>22及其应用。可以同时具有固氮酶活性、高产吲哚乙酸和赤霉素，因此可应用于制备微生物肥料中，促进植物的生长发育。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)2
‑
22，保藏编号为CGMCC：NO.24835。
[0008]本专利技术还提供了一种微生物菌剂，包括枯草芽孢杆菌2
‑
22，保藏编号为CGMCC：NO.24835。
[0009]本专利技术还提供了一种微生物发酵液，使用枯草芽孢杆菌2
‑
22进行发酵，保藏编号为CGMCC：NO.24835。
[0010]本专利技术还提供了一种微生物菌肥，包括枯草芽孢杆菌2
‑
22，保藏编号为CGMCC：NO.24835。
[0011]本专利技术还提供了上述枯草芽孢杆菌2
‑
22，或上述菌剂，或上述发酵液，或上述菌肥在农业、工业生产中的应用。
[0012]优选的：应用于黄瓜、白菜、小麦。
[0013]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种枯草芽孢杆菌2
‑
22及其应用，取得的技术效果具有固氮酶活性，并且能同时高产吲哚乙酸和赤霉素，盆
栽实验和大田实验均证实枯草芽孢杆菌2
‑
22对农作物、蔬菜作物具有促生作用；而且，本专利技术中枯草芽孢杆菌2
‑
22来源于土壤，安全环保、易培养，使用后无污染、无残留、对人畜无害，符合绿色农业的发展要求。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0015]图1附图为本专利技术提供的吲哚乙酸含量、吸光度的标准曲线图。
[0016]图2附图为本专利技术提供的HPLC法测定赤霉素GA3含量与吸收峰面积的标准曲线图。
[0017]图3附图为本专利技术提供的枯草芽孢杆菌2
‑
22菌株的菌落图。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]本专利技术实施例公开了一种枯草芽孢杆菌2
‑
22及其应用。
[0020]实施例中，所用实验材料：
[0021]LB培养基：蛋白胨10g，酵母浸出物5g，氯化钠10g，琼脂20g，添加蒸馏水定容至1L，混匀后分装于三角瓶中，121℃灭菌30min。
[0022]阿须贝氏无氮培养基：甘露醇10g，KH2PO40.2g，MgSO4·
7H2O0.2g，NaCl0.2g，CaSO4·
2H2O0.1g，CaCO35g，添加蒸馏水定容至1L，混匀后分装于三角瓶中，121℃灭菌30min，其中，作为固体培养基时需加入20g琼脂。
[0023]枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2
‑
22保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC：NO.24835，保藏日期为2022年5月6日；本专利技术所用其它原料、试剂均购自市场。
[0024]未提及的实验材料、实验方法为常规实验方法，在此不再赘述。
[0025]实施例1
[0026]菌株2
‑
22的分离、筛选
[0027]菌株2
‑
22分离土壤采集自河北省保定市莲池区玉米田土壤，具体分离、筛选过程为：
[0028]称取10g土壤置于装有90mL含玻璃珠的灭菌生理盐水中，使用涡旋振荡器充分震荡后，将其置于80℃热水中30min，取出后冷却至室温，吸取1mL上清液，采用梯度稀释方法将土壤悬液稀释102、103、104或105倍，取各梯度稀释液0.1mL分别涂布于阿须贝氏无氮培养基上，随后将涂布平板置于30℃恒温培养箱中，倒置培养5天，每天观察培养基上菌落生长情况，采用三区划线得到单菌落，并将其保存于阿须贝氏无氮培养基斜面上，待用；
[0029]通过测定分离到的各菌株固氮酶活性，以及各菌株发酵后吲哚乙酸含量和赤霉素
含量，筛选具有固氮酶活性，高产吲哚乙酸和赤霉素的细菌。
[0030]菌株获得：
[0031]首先采用乙炔还原法对各菌株的固氮酶活性进行测定获得具备固氮酶活性的菌株。
[0032]试验组将保存的各菌株用阿须贝氏固体培养基活化，用接种环挑取菌体接种到装有5mL阿须贝氏固体培养基的10mL试管中，用橡胶塞密封。以未接种菌体的相同试管为对照组。两组均置于30℃培养48h后，向试管中注入试管1/10体积的乙炔气体，继续培养24h，从试管中抽取0.5mL气体注入气相色谱仪(浙江福立分析仪器有限公司FL9790)中，测定乙炔、乙烯的含量。按下列公式计算固氮酶活性大小：
[0033]C＝(h
x
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2
‑
22，其特征在于，保藏编号为CGMCC：NO.24835。2.一种微生物菌剂，其特征在于，包括枯草芽孢杆菌2
‑
22，保藏编号为CGMCC：NO.24835。3.一种微生物发酵液，其特征在于，使用枯草芽孢杆菌2
‑
22进行发酵，保藏编号为CGM...

【专利技术属性】
技术研发人员：高同国，李红亚，郭晓军，朱宝成，白钰，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：