一种鲜乳中外泌体规模化提取方法技术

本发明专利技术公开了一种鲜乳中外泌体规模化提取方法，该方法将鲜乳用亲水疏脂的纳米界面网膜过滤除去鲜乳中细胞碎片及脂肪颗粒，再通过孔径100kDa～300kDa超滤膜的切向流超滤装置超滤对澄清的鲜乳进行浓缩；将浓缩液和聚乙二醇、葡聚糖组合配制的双水相溶液混合后进行相分离，收集下相中富集的外泌体溶液，重复1～2次对外泌体浓缩；再通过高度交联琼脂糖填料柱对浓缩的外泌体进一步分离除去其他的杂蛋白，分离出不同直径的外泌体、外囊泡。本发明专利技术纯化过程简单、无需高速离心、一次性可以处理几十升以上鲜乳，提取纯度高并能有效分离不同粒径的外囊泡，对外泌体损伤小，可以做到大规模的提取。提取。提取。

【技术实现步骤摘要】
一种鲜乳中外泌体规模化提取方法


[0001]本专利技术属于提取工艺
，具体涉及一种规模化提取鲜乳中外泌体的方法。

技术介绍

[0002]外泌体是一类由细胞释放的脂质双层膜的代谢产物，透射电镜下呈圆形或杯状，直径为30～150nm。大量研究表明，外泌体含有多种蛋白质、核酸、脂质等成分。从目前的研究中发现外泌体具有十分光明的应用前景，它含有丰富的标志物，可应用于疾病的监测、治疗等方面。而且不同组织、细胞来源的外泌体都有其来源组织、细胞的特性，在外泌体介导的细胞间物质、信息交流过程中发挥关键作用。同时外泌体在临床治疗、载体药物、临床检测等方面有广大的应用前景，肿瘤细胞外泌体中的蛋白、脂质、RNA、miRNA等组分可作为癌症诊断和预兆。
[0003]在目前研究的鲜乳中也发现大量的外泌体存在，已有研究表明，鲜乳外泌体有助于免疫调节，调节肠道的发育以及对一些疾病有所缓解。国内对于鲜乳外泌体研究主要集中在外泌体的提取和鉴定以及作为药物载体、疾病筛查标志物的研究上，国外对牛乳外泌体的研究更多一点不仅涉及到人体免疫系统、肠道发育、癌症预防、肥胖、糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲜乳中外泌体规模化提取方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：(1)将鲜乳用亲水疏脂的纳米界面网膜进行过滤，除去鲜乳中的脂肪颗粒，收集滤液；(2)将步骤(1)收集的滤液通过孔径100kDa～300kDa超滤膜的切向流超滤装置进行超滤，对除去脂肪颗粒的滤液进行浓缩；(3)将步骤(2)收集的浓缩鲜乳和双水相溶液充分混合后进行离心分离，弃上相，收集下相；下相重复该步骤1～2次，进一步浓缩外泌体溶液；所述双水相溶液是将聚乙二醇和葡聚糖溶解在蒸馏水或者PBS缓冲液中配制而成，双水相溶液中聚乙二醇的浓度为20～40g/L、葡聚糖的浓度为14～20g/L；(4)将步骤(3)中浓缩的外泌体溶液用稀释液稀释后经过凝胶柱进一步分离，所述凝胶柱采用高度交联琼脂糖作为填料，稀释液为含150mM NaCl的20mM pH＝7.2Tris
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HCl缓冲液。2.根据权利要求1所述的鲜乳中外泌体规模化提取方法，其特征在于，步骤(1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鑫，王瑞莉，翟江华，邓晗，程南琼，罗琳娜，李元，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：