一种模拟临床化疗耐药过程的肝癌耐药动物模型构建方法技术

本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法及该方法构建得到的肝癌耐药动物模型，该构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。发展的原位肿瘤发生模型。发展的原位肿瘤发生模型。

【技术实现步骤摘要】
一种模拟临床化疗耐药过程的肝癌耐药动物模型构建方法


[0001]本公开涉及生物
，具体地，涉及一种构建肝癌耐药动物模型的方法、该方法构建得到的肝癌耐药动物模型。

技术介绍

[0002]相对于其它肿瘤类型，肝癌耐药领域的基础和临床研究十分匮乏，特别是缺少合适的动物模型。在以往的研究中，为了定量监测肝癌耐药动物肿瘤动态变化过程，肝癌耐药动物模型均采用裸鼠皮下接种耐药肿瘤细胞或肿瘤组织。临床肝癌是肝癌细胞侵袭肝脏组织，而皮下接种的肿瘤细胞脱离了肝脏的营养及代谢环境；更为重要的是，耐药肿瘤细胞或组织是通过体外细胞培养技术诱导后产生耐药的，而非肝脏肿瘤经化疗药物治疗后产生的耐药，因此无论是肿瘤的生长还是对化疗药物的耐药过程，均与临床肝癌耐药相距甚远。
[0003]现有模型包括人源肿瘤组织异种移植模型，人源肿瘤细胞异种皮下移植模型。但现有三种模型都存在一定的缺陷，比如人源肿瘤组织来源异种移植，存在标本需经过严格的伦理审查，程序复杂且获得性差；现有人源肿瘤细胞异种移植存在荷瘤小鼠必须是免疫严重缺陷型裸小鼠，饲养条件苛刻且价格昂贵，同时移植位置不是肝癌原发部位，不能很好的模拟肝癌的发生发展。可见，以往报道的病人来源肿瘤异种移植模型、细胞来源异种移植在肝癌研究中起到了重要作用，但是它们具有标本获取困难且程序复杂等缺陷。
[0004]因此亟需一种构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。

技术实现思路

[0005]本公开的目的是提供一种构建方法简单便捷、能够真实模拟肝癌耐药发生、发展的原位肿瘤发生模型。
[0006]为了实现上述目的，本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法，该方法包括以下步骤：
[0007]S1、培养荧光标记的肝癌细胞；
[0008]S2、将所述荧光标记的肝癌细胞移植至小鼠肝脏中，得到移植后的小鼠；
[0009]S3、将所述移植后的小鼠培养1
‑
3周后，尾静脉注射荧光显像剂，利用动物活体成像法监测药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度；
[0010]S4、给予小鼠抗肝癌化疗药物治疗，给药3
‑
8周后，利用动物活体成像法监测药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度；若药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度不小于药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度，则得到所述肝癌耐药动物模型。
[0011]根据本公开，所述小鼠为4
‑
6周龄BALB/C裸鼠。
[0012]根据本公开，所述抗肝癌药为索拉非尼，给药量为每2天15
‑
60mg/kg，优选为每2天30mg/kg。
[0013]根据本公开，步骤S2中，所述肝癌细胞的移植量为(2
‑
5)
×
106个HepG2/Luc细胞
(根据细胞量将细胞用PBS定容至20
‑
50μL)。
[0014]根据本公开，所述荧光显像剂包括D
‑
荧光素钾盐和/或
18
F
‑
FDG。
[0015]根据本公开，所述肝癌细胞通过以下方法制备得到：通过脂质体包裹带有neo抗性基因和荧光素酶报告基因的表达质粒PGL4.17，体外转染人肝癌细胞HepG2。
[0016]根据本公开，所述neo抗性基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述荧光素酶报告基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0017]另一方面，本公开提供了上述方法构建得到的肝癌耐药模型。
[0018]通过上述技术方案，本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法及动物模型，利用该方法构建得到的动物模型能够用于定量监测肝癌耐药动物肿瘤动态变化过程，准确模拟肝癌耐药发生、发展，对于肝癌临床研究具有重要意义。
[0019]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0020]附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0021]图1为本公开提供的索拉非尼耐药动物模型时间线示意图。
[0022]图2为各组动物Kaplan
‑
Meier生存曲线图。
[0023]图3为小鼠活体成像图。
[0024]图4为
18
F
‑
FDG MicroPET/CT肿瘤代谢测定图。
[0025]图5为活体成像生物荧光定量图。
[0026]图6为
18
F
‑
FDG MicroPET/CT肿瘤代谢生物荧光定量图。
[0027]图7为小鼠肝与脑的重量比测定图。
[0028]图8为肝脏肿瘤的代表图。
[0029]图9为各组动物肝组织H&E染色图像。
[0030]图10为pGL4.17[Luc2/Neo]荧光素酶表达载体的示意图。
具体实施方式
[0031]以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
[0032]一方面，本公开提供了一种构建肝癌耐药动物模型的方法，该方法包括以下步骤：
[0033]S1、培养荧光标记的肝癌细胞；
[0034]S2、将所述荧光标记的肝癌细胞移植至小鼠肝脏中，得到移植后的小鼠；
[0035]S3、将所述移植后的小鼠培养1
‑
3周后，尾静脉注射荧光显像剂，利用动物活体成像法监测药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度；
[0036]S4、给予小鼠抗肝癌化疗药物治疗，给药3
‑
8周后，利用动物活体成像法持续多次监测药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度；若药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度不小于药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度，则得到所述肝癌耐药动物模型。
[0037]可选地，所述小鼠为4
‑
6周龄BALB/C裸鼠。
[0038]可选地，所述抗肝癌药物为索拉非尼，给药量为每2天15
‑
60mg/kg，优选为每2天
30mg/kg。
[0039]可选地，步骤S2中，所述肝癌细胞的移植量为(2
‑
5)
×
106个HepG2/Luc细胞(根据细胞量将细胞用PBS定容至20
‑
50μL)。
[0040]可选地，所述荧光显像剂包括D
‑
荧光素钾盐和/或
18
F
‑
FDG。
[0041]可选地，所述肝癌细胞通过以下方法制备得到：通过脂质体包裹带有neo抗性基因和荧光素酶报告基因的表达质粒PGL4.17，体外转染人肝癌细胞HepG2。
[0042]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建肝癌耐药动物模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1、培养荧光标记的肝癌细胞；S2、将所述荧光标记的肝癌细胞移植至小鼠肝脏中，得到移植后的小鼠；S3、将所述移植后的小鼠培养1
‑
3周后，尾静脉注射荧光显像剂，利用动物活体成像法监测药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度；S4、给予小鼠抗肝癌化疗药物治疗，给药3
‑
8周后，利用动物活体成像法监测药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度；若药物干预后小鼠体内肝癌细胞的荧光强度不小于药物干预前小鼠体内肝癌细胞的初始荧光强度，则得到所述肝癌耐药动物模型。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠为4
‑
6周龄BALB/C裸鼠。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗肝癌药物为索拉非尼，给药量为每2天15
‑
60mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦琼，马兆臣，刘毓东，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：