一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法技术

本发明专利技术涉及一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，所述方法包括烟草基因组DNA提取方法、引物的设计、LAMP反应体系建立、LAMP反应体系的优化。本发明专利技术根据筛选的烟草特异性基因Ntsp151序列保守区设计LAMP引物，建立了基于颜色判定的LAMP方法，能够快速地对烤后烟叶、成品卷烟及茶烟等进行鉴别，检测限达到200copies/反应；对非烟样本检测结果均为阴性，具有较好的特异性；与qPCR检测结果符合率为96.7％，但LAMP方法在1h左右即可观察结果，快速简便，对于临检的快速结果判断有重要的意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法


[0001]本专利技术属于分子生物学鉴定检测方法
，尤其是涉及一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法


技术介绍

[0002]烟草是一种重要的经济作物，是制备商品化卷烟的主要原料。在市场经济的调节下，烟草行业的重要性日益显现，也从单纯的高速增长逐渐演变成高质量的发展，因此对烟草的“真”“假”鉴别仍是烟草检验中面临的一个重要挑战。烟草的“真”“假”鉴别主要是利用分子生物学的方法，例如特征序列扩增区域标记(SCAR)、随机扩增多态性DNA标记(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、简单重复序列检测(SSR)和单核苷酸多态性(SNP)等，这些技术往往需要PCR仪、基因测序仪等复杂的设备，在一定程度上限制了在专卖执法一线临检中的应用。

技术实现思路

[0003]本专利技术正是为了解决上述问题缺陷，提供一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法。
[0004]本专利技术采用如下技术方案实现。
[0005]一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，其特征在于，所述方法包括烟草基因组DNA提取方法、引物的设计、LAMP反应体系建立、LAMP反应体系的优化。2.根据权利要求1所述的一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，其特征在于，所述烟草基因组DNA提取方法包括：称取10～15mg烟草样本加入到EP管中，加入5％Chelex
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100悬浊液，用研磨棒研磨1～2min，震荡混悬10～30s；加入1/10体积的蛋白酶K和1/10体积的RnaseA，震荡混悬10～30s，55℃水浴作用5min；100℃煮沸5min；震荡混悬10～30s，12000r/min离心2min，取上清，待检。3.根据权利要求1所述的一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，其特征在于，所述引物的设计包括外引物F3/B3、内引物FIP/BIP、环引物LB；F3：5'
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TTGGCTATGGAATTTATCACAT
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3'；B3：5'
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AGCCGCTTTCAAAATCCG
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3'；FIP：5'
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ACCCGAGCCATCCTCTTCTTCTATATTCCTTTTTCTTGGCACATT
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3'；BIP：5'
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TACGACTACGCCTCGCTGTTAGGCTCAATTTTCCCCACT
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3'；LB：5'
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GCTTAGGCATGTTTGAGCCAATT
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3'。4.根据权利要求1所述的一种适用于烟草快速检测的可视化LAMP方法，其特征在于，所述LAMP反应体系建立包括：以合成的pcDNA3.1
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Ntsp151重组质粒为模板，建立基于颜色判定的LAMP检测体系；反...

【专利技术属性】
技术研发人员：张轲，童治军，杨金初，秦世春，陈丹，王春琼，孙浩巍，张晓伟，孙九喆，龙杰，李萌，蔡洁云，张冀武，盖小雷，
申请(专利权)人：云南省烟草质量监督检测站，
类型：发明
国别省市：