粉蕉成熟相关基因MaMYC2-10及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种粉蕉成熟相关基因MaMYC2

【技术实现步骤摘要】
粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10及其应用。

技术介绍

[0002]香蕉是重要的热带水果，在世界经济贸易中占有重要的地位。其中粉蕉(Musa ABB Pisang Awak，FJ)属于芭蕉属香蕉杂交品种，与巴西蕉(Musa acuminate L.AAA group cv.Cavendish，BX)相比风味和口感明显不同，营养丰富，酸甜可口，其成熟过程比巴西蕉快，在国际国内市场上受到普遍欢迎，应用前景广阔。
[0003]因此深入研究粉蕉果实采后成熟的分子调控机制，挖掘调控粉蕉果实快速成熟的关键基因，通过生物技术对香蕉进行遗传改良，能进一步提高粉蕉产业商品价值，拓展粉蕉产业的可持续性发展，是发展热带特色高效农业的国家战略需求之一。
[0004]目前，香蕉基因组中还没有找到与果实采后成熟相关基因，因此，迫切希望找到一个调控香蕉果实成熟的有意义基因，从而促进香蕉的采后成熟，实现香蕉的遗传改良。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10及其应用。本专利技术为香蕉成熟相关基因的挖掘做贡献，也为果实早熟基因的开发与应用的生产问题提供基因资源。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所设计一种粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10，所述基因MaMYC2<br/>‑
10 CDS的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示。
[0007]本专利技术还提供了一种上述基因MaMYC2
‑
10编码的蛋白MaMYC2
‑
10，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0008]本专利技术还提供了一种用于获得上述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的引物对，所述引物对为：
[0009]正向引物F：5
′‑
ATGAACCTGTGGGCCGACGACAACG
‑3′
，如SEQ ID NO:3所示；
[0010]反向引物R：5
′‑
CCAACTAGATAAGGCCTCA
‑3′
，如SEQ ID NO:4所示。
[0011]本专利技术还提供了一种利用上述引物对获得成熟相关基因MaMYC2
‑
10的方法，包括以下步骤：
[0012]以粉蕉果实的cDNA为模板和上述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的引物对，进行PCR扩增，纯化得到成熟相关基因MaMYC2
‑
10。
[0013]本专利技术还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体含有上述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的植物表达载体，其中，所述植物表达载体为pCAMBIA
‑
1304。
[0014]上述表达载体可以采用基因重组领域中的常用载体，例如病毒、质粒等；本专利技术对此不设限定。
[0015]本专利技术还提供了一种上述重组表达载体的构建方法，包括以下步骤：
[0016]将目的片段导入克隆载体18T中，然后进行将含目的基因的克隆载体
MaMYC2
‑
10
‑
18T和pCAMBIA
‑
1304用NcoⅠ和SpeⅠ双酶切进行酶切，再将得到的目的片段连接到酶切过的pCAMBIA
‑
1304载体上即得到重组表达载体pCAMBIA
‑
1304
‑
MaMYC2
‑
10。
[0017]本专利技术还提供了一种含有上述重组表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞为农杆菌GV3101。
[0018]下述各项之一在调控果实成熟乙烯生物合成中的应用，其中，它包括：
[0019](1)上述的成熟相关基因MaMYC2
‑
10；
[0020](2)上述的重组表达载体；
[0021](3)上述的宿主细胞。
[0022]作为优选方案，所述植物为番茄或粉蕉。
[0023]下述各项之一在培育果实易成熟新品种中的应用，其中，它包括：
[0024](1)上述的成熟相关基因MaMYC2
‑
10；
[0025](2)上述的重组表达载体；
[0026](3)上述的宿主细胞。
[0027]上述新品种为番茄或香蕉；
[0028]以番茄为例；将含有粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10的pCAMBIA
‑
1304载体质粒(pCAMBIA
‑
1304
‑
MaMYC2
‑
10)的农杆菌菌液活化，侵染番茄叶片，进行共培养后的外植体置于芽诱导培养基中进行继代培养，之后进行生根培养，获得转MaMYC2
‑
10基因番茄植株。
[0029]本专利技术的原理：
[0030]本专利技术通过实时定量PCR技术筛选出来的对粉蕉果实采后成熟起着重要调控作用的一个功能基因MaMYC2
‑
10，属于碱性螺旋
‑
环
‑
螺旋bHLH类转录因子基因超家族成员。MYC在结构上包含bHLH保守结构域，可与其它转录因子形成同源或异源二聚体，另外一个结构域为碱性区域，是转录激活域，是MYC调控的含有G
‑
box元件的启动子结合区。
[0031]MYC类转录因子是茉莉酸信号反应中的关键核心转录因子。茉莉酸是一种重要的植物激素，在调控乙烯生物合成和促进果实成熟过程已得到广泛研究。研究表明MYC类转录因子通过与其N端的MIR作用区与MYB类转录因子结合，参与调控植物的花青素合成，酵母单杂和双荧光素酶实验表明MYC类转录因子通过与二氢黄酮醇还原酶启动子的结合可激活二氢黄酮醇还原酶基因的转录。最近在拟南芥的研究证明KIX
‑
PPD
‑
MYC复合物能够参与调控种子的发育。苹果中已有研究证明MdMYC2能够与MdACS1和MdACO1的启动子结合，直接参与对苹果成熟过程中的乙烯生物合成的调控。此外MdMYC2能够与MdERF2结合，通过MdERF2与MdERF3的相互作用解除MdERF3对MdACS1的转录抑制，间接地参与了乙烯的生物合成的调控。
[0032]MaMYC2
‑
10蛋白保守结构域分析表明，它含有典型的bHLH
‑
MYC_N结构域、bHLH
‑
AtAIB和PHA03247结构域，我们推测MaMYC2
‑
10可能参与了对粉蕉果实成熟乙烯的生物合成调控作用。
[0033]本专利技术验证了基因MaMYC2
‑
10在转MaMYC2<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粉蕉成熟相关基因MaMYC2
‑
10，其特征在于：所述基因MaMYC2
‑
10 CDS的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种权利要求1所述基因MaMYC2
‑
10编码的蛋白MaMYC2
‑
10，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.一种用于获得权利要求1所述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的引物对，其特征在于：所述引物对为：正向引物F：5
′‑
ATGAACCTGTGGGCCGACGACAACG
‑3′
，反向引物R：5
′‑
CCAACTAGATAAGGCCTCA
‑3′
。4.一种利用权利要求3所述引物对获得成熟相关基因MaMYC2
‑
10的方法，其特征在于：包括以下步骤：以粉蕉果实的cDNA为模板和上述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的引物对，进行PCR扩增，纯化得到成熟相关基因MaMYC2
‑
10。5.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体含有权利要求1所述成熟相关基因MaMYC2
‑
10的植物表达载体，其中，所述植物表达载体为...

【专利技术属性】
技术研发人员：李美英，胡伟，颜彦，谢郑楠，杨景豪，曾黎明，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：