转基因马铃薯PH05-026-0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了转基因马铃薯PH05

【技术实现步骤摘要】
转基因马铃薯PH05
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026
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0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于转基因产品检测领域，具体涉及转基因马铃薯PH05
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026
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0048实时荧光PCR 检测引物探针、方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]目前国外上市的转基因马铃薯约47种(ISSSA数据)，转基因马铃薯批准种植或作为食用的国家和地区主要包括美国、加拿大、澳大利亚、日本、韩国、德国、瑞典、捷克、墨西哥等。我国农业部尚未批准转基因马铃薯上市。2017年01月深圳检出6批次进口薯片含转基因成分，退运4.8吨(https://www.guancha.cn/society/2017_01_25_391308.shtml)。随着食品的进口量不断增大，转基因马铃薯及产品入境风险增高，需要有特异、快速、准确、高通量的检测技术作为支撑。
[0003]马铃薯PH05
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026
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0048是巴斯夫公司研发的抗晚疫病及咪唑啉酮耐受的转基因马铃薯品系。
[0004]目前对转基因产品多数国家均采用相应的标识管理制度，标识管理制度的建立和实施依赖于有效准确的检测鉴定技术。为打破其他国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒，完善我国转基因产品定量检测技术体系，保护消费者对转基因产品的知情权和选择权，为进出境口岸监管部门提供转基因马铃薯PH05
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026
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0048检测鉴定的方法，针对转基因马铃薯 PH05
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026
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0048构建特异性实时PCR检测方法。

技术实现思路
：
[0005]本专利技术的目的是提供一种特异性好、灵敏度高、稳定性强，快速准确鉴别转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针：
[0007]所述的检测引物如下所示：
[0008]PH05
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026
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0048
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3F：5
’‑
GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT
‑3’
(如SEQ ID NO.1所示)；
[0009]PH05
‑
026
‑
0048
‑
3R：5
’‑
TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC
‑3’
(如SEQ ID NO.2所示)；
[0010]所述的检测探针如下所示：
[0011]PH05
‑
026
‑
0048
‑
3P：5
’‑
AAGTTGTCCTTGGTTTTAT
‑3’
(如SEQ ID NO.3所示)，探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。
[0012]所述的荧光报告基团优选为VIC，所述的荧光淬灭基团优选为BHQ1。
[0013]本专利技术的第二个目的是提供一种转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针：
[0014]所述的检测引物如下所示：
[0015]PH05
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026
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0048
‑
3F：5
’‑
GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT
‑3’
(如SEQ ID NO.1所示)；
[0016]PH05
‑
026
‑
0048
‑
3R：5
’‑
TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC
‑3’
(如SEQ ID NO.2所示)；
[0017]所述的检测探针如下所示：
[0018]PH05
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026
‑
0048
‑
3P：5
’‑
AAGTTGTCCTTGGTTTTAT
‑3’
(如SEQ ID NO.3所示)，探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。
[0019]本专利技术的第三个目的是提供一种转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0020](1)提取待测样品的基因组DNA作为模板；
[0021](2)加入上述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；
[0022](3)将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为PH05
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026
‑
0048转基因马铃薯。
[0023]优选，所述的步骤(3)的根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05
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026
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0048的标准为：如果扩增曲线有典型荧光扩增曲线，则说明样品为转基因马铃薯PH05
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026
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0048；如果扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则说明样品不是PH05
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026
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0048转基因马铃薯。
[0024]优选，所述的步骤(2)的扩增反应体系为：25μL，包括Premix Ex Taq 12.5μL，ROXReference Dye II 0.2μL，10μmol/L检测引物PH05
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026
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0048
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3F 0.5μL，10μmol/L检测引物 PH05
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026
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0048
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3R 0.5μL，10μmol/L检测探针PH05
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026
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0048
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3P 0.5μL，DNA模板2μL 和ddH2O 8.8μL；所述的步骤(3)的实时荧光PCR反应，其反应程序为95℃30s；95℃5 s、60℃34s，40个循环，于60℃收集荧光信号。
[0025]本专利技术的第四个目的是提供一种转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR定量检测方法，包括以下步骤：
[0026](1)提取转基因马铃薯PH05
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针，其特征在于：所述的检测引物如下所示：PH05
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026
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0048
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3F：5
’‑
GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT
‑3’
；PH05
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026
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0048
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3R：5
’‑
TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC
‑3’
；所述的检测探针如下所示：PH05
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026
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0048
‑
3P：5
’‑
AAGTTGTCCTTGGTTTTAT
‑3’
，探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测引物组，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。3.一种转基因马铃薯PH05
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026
‑
0048特异性实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于：所述的检测引物如下所示：PH05
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026
‑
0048
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3F：5
’‑
GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT
‑3’
；PH05
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026
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0048
‑
3R：5
’‑
TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC
‑3’
；所述的检测探针如下所示：PH05
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026
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0048
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3P：5
’‑
AAGTTGTCCTTGGTTTTAT
‑3’
，探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。4.根据权利要求3所述的转基因马铃PH05
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026
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0048薯特异性实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。5.一种转基因马铃薯PH05
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0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品的基因组DNA作为模板；(2)加入权利要求1所述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；(3)将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05
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0048。6.根据权利要求5所述的转基因马铃薯PH05
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026
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0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤(3)的根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05
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0048的标准为：如果扩增曲线有典型荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘二龙，卢丽，关丽军，李志勇，魏霜，郑冠津，
申请(专利权)人：黄埔海关技术中心，
类型：发明
国别省市：