一种规模化提纯干细胞衍生物的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，属于生物细胞提纯技术领域。该技术方案中实现了无血清、无动物源成分、无培养基成分、高纯度、高生长因子浓度和高外泌体含量的高品质要求的衍生物规模化制备。该提纯方法实现了大规模、批量生产的目标，并在关键节点进行质量控制，保障产品质量的均一性、安全性和稳定性。该衍生物获得的冻干粉产品，可有效延长保存期限。产品中有效物质浓度含量高，有助于促进机体功能的恢复。助于促进机体功能的恢复。助于促进机体功能的恢复。

【技术实现步骤摘要】
一种规模化提纯干细胞衍生物的方法及应用


[0001]本专利技术属于生物细胞提纯
，具有涉及一种规模化提纯干细胞衍生物的方法及应用。

技术介绍

[0002]干细胞衍生物是由干细胞旁分泌作用产生的物质，也可称为分泌组，它执行多种生物学功能，例如抗炎、抗凋亡、调节免疫、促进组织再生等，这些功能的执行者主要是可溶性的分泌因子以及外泌体。
[0003]干细胞衍生物中的可溶性因子主要有VEGF、HGF、FGF、IGF
‑
1、IL
‑
1、PGE2、IDO、TGFβ2等。这些因子参与血管再生、免疫调节、细胞增殖、细胞凋亡等细胞生命活动。
[0004]外泌体（Exosome）是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40
‑
100 nm。
[0005]目前市场上衍生物的产品大多纯度不高，制备规模较小，还存在存储条件要求高、保质期短等一系列问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，该技术方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将分离获得的干细胞在无血清培养基中培养扩增并冻存，建立细胞库并进行特征检测；S2、从上述细胞库中选取并复苏细胞后，利用无血清培养基培养到80%汇合，采用衍生物收集培养基进行干细胞衍生物收集；S3、对上述收集到的干细胞衍生物进行逐级离心、过滤后去除细胞碎片及大颗粒；S4、采用切向流浓缩处理和清洗修理后，去除培养基成分，获得衍生物浓缩液，进行分装保存或将浓缩液分装后分别进行冻干处理获得衍生物冻干粉保存；所述衍生物包括外泌体和可溶性细胞因子。2.根据权利要求1所述的一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，其特征在于，所述干细胞包括脐带组织、脂肪组织或胎盘组织来源的间充质干细胞、神经干细胞、表皮干细胞、毛囊干细胞和上皮干细胞中的任意一种。3.根据权利要求1所述的一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，其特征在于，所述S1中，无血清培养基中培养扩增时采用单层/多层细胞工厂或生物反应器进行，进入细胞库的细胞以无血清冻存液冻存；所述培养条件为：氧分压为3
‑
5%的低氧条件。4.根据权利要求1所述的一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，其特征在于，所述特征检测包括干细胞流式检测、病毒检测、无菌检测、内毒素检测和支原体检测；所述干细胞流式检测为对CD73、CD90、CD105、CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA
‑
DR、nestin和sox2进行检测；所述病毒检测为对HBV、HCV、HCMV、EBV、HIV、B19、HPV、HHV6/7/8、HTLV进行检测。5.根据权利要求1所述的一种规模化提纯干细胞衍生物的方法，其特征在于，所述S2中，衍生物收集培养基为含有卡巴胆碱的基础培养基；在氧分压为3
‑
5%的低氧条件下，所述培养时长为20

【专利技术属性】
技术研发人员：杨印祥，
申请(专利权)人：天津永泰生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：