用于检测猫艾滋病病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体提供了用于检测猫艾滋病病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明专利技术提供的用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物；所述正向引物的序列为5

【技术实现步骤摘要】
用于检测猫艾滋病病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及用于检测猫艾滋病病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]猫艾滋病(FAIDS)是由猫免疫缺陷病毒(Feline Immunodeficiency Virus，FIV)引发的潜伏期长的慢性接触性动物传染病。FIV属于逆转录病毒科慢病毒属，是有囊膜的单股RNA病毒。该病毒主要破坏猫科动物的免疫系统，主要临床症状表现为口炎、中枢神经疾病、皮肤病、腹泻、肺炎等，严重地导致死亡。FIV感染呈全球性分布，主要经血液、唾液和尿液传播。数据表明，公猫的感染率为母猫的2倍。流浪猫因打斗、撕咬，感染率可能高于家猫。怀孕的母猫会将自身的FIV病毒传染给胎儿。
[0003]目前实验室诊断FIV的方法有：病毒分离鉴定、免疫印迹试验、免疫荧光、PCR、ELISA、血清学检验等。其中临床常用的检测方法为RT
‑
PCR。PCR技术因敏感性高、特异性强、费用低等优点已成为一种经典的检测方法，广泛用于猫艾滋病病毒的检测。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服现有技术中对FIV检测灵敏毒低等问题。
[0005]为此，本专利技术提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物；
[0006]所述正向引物的序列为5
’‑
CCGCAGTATGTAGCCCTTGA
‑3’
；
[0007]所述反向引物的序列为5<br/>’‑
TCTGGGCTCTGCTTGTTGTT
‑3’
。
[0008]具体的，上述引物组合物还包括探针；
[0009]所述探针的序列为5
’‑
CACTGAAACAGATGACAGCTGAGTA
‑3’
。
[0010]具体的，上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0011]本专利技术还提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的试剂盒，包括PCR反应液；所述PCR反应液包括上述用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物。
[0012]具体的，上述PCR反应液包括2mM的MgCl2，50mM的Tris(PH8.3)，500mg/L的BSA，100μM的dNTPs，0.1μM的正向引物，0.1μM的反向引物，0.1μM的探针。
[0013]具体的，上述试剂盒还包括酶混合液；所述酶混合液包括40U/μl的RNA酶抑制剂、25U/μl的逆转录酶和5U/μl的Taq酶。
[0014]具体的，上述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为猫艾滋病病毒阳性样本；所述阴性对照为超纯水。
[0015]本专利技术还提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的方法，包括以下步骤：
[0016](1)提取待测样本的DNA；
[0017](2)以待测样本的DNA为模板，利用上述引物组合物进行荧光定量PCR反应；
[0018](3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
[0019]具体的，上述步骤(2)中PCR反应程序为：42℃，15min；95℃，3min；94℃，10s，58℃，20s，40个循环。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0021]本专利技术提供的这种用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物特异性高、重复性好的同时灵敏度更高，灵敏度可达500copies/μL，为检测猫艾滋病病毒提供可靠的依据。
[0022]以下将结合附图对本专利技术做进一步详细说明。
附图说明
[0023]图1是本专利技术实施例2中猫艾滋病病毒检测结果示意图。
具体实施方式
[0024]下面将结合实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。尽管已经详细描述了本专利技术的代表性实施例，但是本专利技术所属
的普通技术人员将理解，在不脱离本专利技术范围的情况下可以对本专利技术进行各种修改和改变。因此，本专利技术的范围不应局限于实施方案，而应由所附权利要求及其等同物来限定。
[0025]本专利技术提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物、探针；
[0026]所述正向引物的序列为5
’‑
CCGCAGTATGTAGCCCTTGA
‑3’
；
[0027]所述反向引物的序列为5
’‑
TCTGGGCTCTGCTTGTTGTT
‑3’
；
[0028]所述探针的序列为5
’‑
CACTGAAACAGATGACAGCTGAGTA
‑3’
。
[0029]探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0030]本专利技术还提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、阳性对照和阴性对照。
[0031]所述PCR反应液包括2mM的MgCl2，50mM的Tris(PH8.3)，500mg/L的BSA，100μM的dNTPs，0.1μM的上述正向引物，0.1μM的上述反向引物，0.1μM的上述探针；
[0032]所述酶混合液包括40U/μl的RNA酶抑制剂、25U/μl的逆转录酶和5U/μl的Taq酶；
[0033]所述阳性对照为猫艾滋病病毒阳性样本；所述阴性对照为超纯水。
[0034]本专利技术还提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的方法，包括以下步骤：
[0035](1)提取待测样本的DNA；
[0036](2)以待测样本的DNA为模板，利用上述引物组合物进行荧光定量PCR反应；PCR反应程序为：42℃，15min；95℃，3min；94℃，10s，58℃，20s，40个循环；
[0037](3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
[0038]下面通过具体实施例对本专利技术的用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物、试剂盒及方法的效果进行研究。
[0039]实施例1：
[0040]本实施例提供了一种用于检测猫艾滋病病毒的试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、阳性对照和阴性对照。
[0041]所述PCR反应液包括2mM的MgCl2，50mM的Tris(PH8.3)，500mg/L的BSA，100μM的dNTPs，0.1μM的正向引物，0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，其特征在于：包括正向引物、反向引物；所述正向引物的序列为5
’‑
CCGCAGTATGTAGCCCTTGA
‑3’
；所述反向引物的序列为5
’‑
TCTGGGCTCTGCTTGTTGTT
‑3’
。2.如权利要求1所述的用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，其特征在于：还包括探针；所述探针的序列为5
’‑
CACTGAAACAGATGACAGCTGAGTA
‑3’
。3.如权利要求2所述的用于检测猫艾滋病病毒的引物组合物，其特征在于：所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。4.一种用于检测猫艾滋病病毒的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液；所述PCR反应液包括权利要求1
‑
3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡雨晴，张炳为，
申请(专利权)人：苏州中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：