用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体提供了用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物、试剂盒及方法。本发明专利技术提供了用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物；所述正向引物序列为5

【技术实现步骤摘要】
用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]猫传染性腹膜炎(feline infectious peritonitis，FIP)是一种由猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus，FIPV)感染引起的病毒性传染病，主要临床症状表现为腹膜炎、腹腔积液及各类脏器肿大，是影响养猫业发展的重要疾病之一。FIPV属于冠状病毒科冠状病毒属，是一种有囊膜不分节段的单股RNA病毒。各种年龄的猫均可感染,但主要侵害3岁以下,尤其是4
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14月龄的猫。根据临床表现不同，可将猫传染性腹膜炎分为湿性、干性以及混合性三种类型。湿性FIP主要表现为胸腔或腹腔积液，干性FIP主要表现为腹腔脏器形成肉芽肿以及脑部或眼部的病变，而当湿性和干性的症状共同出现时，则为混合性FIP。该病毒一般认为经口鼻感染，常由带毒猫从排泄的粪便中将病毒传染给同居的猫，少数可经寝具、食皿、衣服、昆虫或人等途径传播，带毒猫可通过胎盘直接把病毒传染给仔猫。目前实验室诊断FIPV的方法有：病毒分离鉴定、中和试验、免疫荧光、PCR、ELISA等。但大多数试验都只能检测出猫咪体内是否有冠状病毒的抗体，而不能区分检测到的抗体是否是由能造成猫咪FIPV的那类冠状病毒产生。相对于传统的PCR检测方法，RT
‑
PCR速度更快并可进行病毒定量，这也是现在临床普遍使用的一种快速PCR检测方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术对FIPV检测灵敏毒低等问题。
[0004]为此，本专利技术提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物；
[0005]所述正向引物序列为5
’‑
CACAGGGACAACGCGTCAA
‑3’
；
[0006]所述反向引物序列为5
’‑
CGACCACGAGAGTTAGAACGA
‑3’
。
[0007]具体的，上述用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物还包括探针；
[0008]所述探针序列为5
’‑
TGGGGAGATGAACCTTCCAAAAGACGT
‑3’
。
[0009]具体的，上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0010]本专利技术还提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的试剂盒，包括PCR反应液；所述PCR反应液包括上述用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物。
[0011]具体的，上述PCR反应液包括2mM的MgCl2，50mM的Tris，500mg/L的BSA，100μM的dNTPs，0.1μM的正向引物，0.1μM的反向引物，0.1μM的探针。
[0012]具体的，上述试剂盒还包括酶混合液；所述酶混合液包括40U/μl的RNA酶抑制剂、25U/μl的逆转录酶和5U/μl的Taq酶。
[0013]具体的，上述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为犬传染性腹膜炎病毒阳性样本；所述阴性对照为超纯水。
[0014]本专利技术还提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的方法，包括以下步骤：
[0015](1)提取待测样本的DNA；
[0016](2)以待测样本的DNA为模板，利用上述引物组合物进行荧光定量PCR反应；
[0017](3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
[0018]具体的，上述步骤(2)中PCR反应程序为：42℃，15min；95℃，3min；94℃，10s，58℃，20s，40个循环。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0020]本专利技术提供的这种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物具有特异性好、灵敏度高、重复性好以及检测结果可靠等优点。灵敏度可达500copies/μL，能够对猫传染性腹膜炎病毒进行特异性检测,且设计合成的引物对之间以及引物与其他病毒之间无交叉反应，可用于临床猫传染性腹膜炎病毒的快速诊断和流行病学调查,具有一定的实用性。
[0021]以下将结合附图对本专利技术做进一步详细说明。
附图说明
[0022]图1是本专利技术实施例2中犬传染性腹膜炎病毒检测结果示意图。
具体实施方式
[0023]下面将结合实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。尽管已经详细描述了本专利技术的代表性实施例，但是本专利技术所属
的普通技术人员将理解，在不脱离本专利技术范围的情况下可以对本专利技术进行各种修改和改变。因此，本专利技术的范围不应局限于实施方案，而应由所附权利要求及其等同物来限定。
[0024]本专利技术提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，包括正向引物、反向引物、探针；
[0025]所述正向引物序列为5
’‑
CACAGGGACAACGCGTCAA
‑3’
；
[0026]所述反向引物序列为5
’‑
CGACCACGAGAGTTAGAACGA
‑3’
；
[0027]所述探针序列为5
’‑
TGGGGAGATGAACCTTCCAAAAGACGT
‑3’
。
[0028]探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0029]本专利技术还提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、阳性对照和阴性对照；
[0030]所述PCR反应液包括2mM的MgCl2，50mM的Tris(PH8.3)，500mg/L的BSA，100μM的dNTPs，0.1μM的上述正向引物，0.1μM的上述反向引物，0.1μM的上述探针；
[0031]所述酶混合液包括40U/μl的RNA酶抑制剂、25U/μl的逆转录酶和5U/μl的Taq酶；
[0032]所述阳性对照为犬传染性腹膜炎病毒阳性样本；所述阴性对照为超纯水。
[0033]本专利技术还提供了一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的方法，包括以下步骤：
[0034](1)提取待测样本的DNA；
[0035](2)以待测样本的DNA为模板，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，其特征在于：包括正向引物、反向引物；所述正向引物序列为5
’‑
CACAGGGACAACGCGTCAA
‑3’
；所述反向引物序列为5
’‑
CGACCACGAGAGTTAGAACGA
‑3’
。2.如权利要求1所述的用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，其特征在于：还包括探针；所述探针序列为5
’‑
TGGGGAGATGAACCTTCCAAAAGACGT
‑3’
。3.如权利要求2所述的用于检测犬传染性腹膜炎病毒的引物组合物，其特征在于：所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。4.一种用于检测犬传染性腹膜炎病毒的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液；所述PCR反应液包括权利要求1
‑
3任意一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡雨晴，张炳为，
申请(专利权)人：苏州中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：