一种AOA-2-PXB@LNP脂质纳米粒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种AOA

【技术实现步骤摘要】
一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒及制备方法


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒及制备方法。

技术介绍

[0002]多粘菌素是由广泛分布于土壤的多粘芽孢杆菌产生的一种具有抗菌活性的阳离子多肽，最早于1949年在日本发现，具有亲水和亲脂的双亲性。在临床上使用的仅有两种：多粘菌素B(po l ymyx i n B)和多粘菌素E(po l ymyx i n E)。多粘菌素B主要是以活性抗菌化合物硫酸多粘菌素B的形式作静脉给药，但是由于显著的肾毒性和神经毒性已经被弃用，近年来因为耐药问题的逐渐加重又重新启用，但是毒性问题仍未得到解决，并且也出现了多粘菌素耐药的菌株。
[0003]目前临床耐药问题严重，急需研发新抗生素，但是抗生素研发周期长，投入大，因此目前较好的解决方案是对现有抗生素进行改良。纳米抗生素就是一个重要的改良方向。纳米抗生素的研发方向目前有：1.本身具有抗菌效果的纳米材料，例如：纳米银、氧化铈等。2.利用纳米载体，改变抗生素的给药途径，例如：口服纳米抗生素中，纳米材料的主要作用是维持胃酸环境下药物的稳定性。3.具有控释效果，例如：可在炎症部位受到炎症因子的调控才释放，延长药物释放时间、增加药效等。
[0004]脂质体是由磷脂为膜材包合而成，磷脂是形成脂质体双分子层的基础物质，具有良好的生物相容性。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体。目前，除了mRNA疫苗递送，脂质体也被广泛运用在各大疾病治疗领域。我们使用的DOTAP是阳离子脂质体研究中常用的脂质，化学名为(溴化三甲基
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2,3
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二油酰氧基丙基铵，分子式C42H80NO4C l，分子量698.6)，是一种带正电荷的两亲性类脂化合物。由于其带正电荷的特性易于被肺等疏松组织吸附，具有一定的器官特异性。目前常用于核酸和蛋白质递送，较少应用于小分子化合物。
[0005]聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(po l y(l act i c
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co
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g l yco l i c ac i d)，PLGA)由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证，被正式作为药用辅料收录进美国药典。
[0006]为起到特异性靶向细菌外膜的效果，本申请专利技术人选取了OmpA这一蛋白作为靶点。OmpA在细菌外膜上广泛表达，在革兰氏阴性菌外膜表面尤其多，且在进化上非常保守。有研究团队根据它的空间结构设计了可与其相互作用的小分子多肽AOA
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2，假设OmpA的大小和形状可能允许容纳六肽配体,考虑到环化可能增加蛋白水解的抗性并抑制肽序列的构象灵活性，于是设计了一个对称环状六肽的虚拟库作为潜在的OmpA结合剂。所有环状六肽都含有两个固定的脯氨酸残基以促进环化。随后根据大肠杆菌和鲍曼不动杆菌的OmpA的TM结构域对该肽库进行了计算筛选，并根据评分函数进行排序，验证了其分别在体外与体内与抗生素间的协同抗菌作用(Parra
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M i l l
á
n et al.,2018,Ayerbe
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Al gaba et al.,2021)。说明了AOA
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2具有增强抗生素对革兰氏阴性菌抗菌效果的作用。但是并没有利用具
有与OmpA空间结构相互作用的特性，将其作为靶头应用于纳米抗生素的递送，以增加抗生素的靶向性。
[0007]现有的PXB纳米剂型改良方案：
[0008]1.改变PXB的使用途径：
[0009]1)口服：治疗囊性纤维化、肺炎、菌血症、尿路感染
[0010]2)吸入：治疗囊性纤维化、肺炎
[0011]3)局部使用：眼科治疗
[0012]2.直接对多粘菌素B结构进行改良的方案：
[0013]1)PXB主氨基和肉桂醛羰基间建立亚胺键，增加药物亲脂性和分子极性，减慢药物释放。
[0014]2)PXB与聚乙二醇甲基醚丙烯酸酯(PEGA
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480)生物结合物，体外抑菌活性更好。
[0015]3)PXB与金纳米粒子使用聚乙二醇作为连接剂结合。
[0016]因此，现有技术中的PXB纳米制剂存在以下缺陷：
[0017]1、目前的PXB纳米制剂，主要是为了改变给药途径和增加抗菌效果，并没有针对感染局部及细菌本身精准抗菌的设计。
[0018]2、研发成本高，不易实现快速转化。
[0019]为此，本专利技术旨在提供一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒及制备方法，以解决上述问题。

技术实现思路

[0020]本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒及制备方法。
[0021]为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
[0022]S1、溶液配制：
[0023]将AOA
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2溶于水配置成50mg/ml溶液；将PXB溶于水配置成100mg/m l溶液；将PVA溶于水配置成0.01mg/ml的水溶液；将PLGA溶于二氯甲烷配置成20mg/m l溶液；将DOTAP溶于无水乙醇配置成10mg/ml溶液；将DSPC溶于无水乙醇配置成20mg/ml溶液；将Cho l溶于无水乙醇配置成10mg/m l溶液，备用；
[0024]S2、制备PXB纳米粒：
[0025]取20mg PLGA、200u l丙酮及5mg PXB，于100w冰浴超声6mi n，超声5s暂停5s；取4ml 0.22um注射器过滤器过滤后的1％PVA水溶液，加入超声后的混合物中；继续于100w冰浴超声6mi n，超声5s停5s；超声后，37℃减压旋蒸5mi n至气泡消失，溶液呈珠光色均匀分散，即得PXB纳米粒溶液；
[0026]S3、制备脂质外膜：
[0027]根据比例分别取DOTAP、DSPC、Cho l、AOA
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2溶液进行超声混匀后，37℃减压旋蒸20mi n成脂质薄膜；将步骤S2中制得的PXB纳米粒溶液加入成好的脂质薄膜中，40℃旋蒸水化10mi n；最终将得到的脂质纳米粒再次80w冰浴超声6mi n，超声3s，停3s，获得制备好的AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒。
[0028]进一步地，所述DOTAP、DSPC和Cho l为PXB纳米脂质体的组成组分，且所述DOTAP、DSPC和Cho l的配比为1:4:3。
[0029]本专利技术还提供了基于上述一种AOA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AOA
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PXB@LNP脂质纳米粒的制备方法，其特征是：包括以下步骤：S1、溶液配制：将AOA
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2溶于水配置成50mg/ml溶液；将PXB溶于水配置成100mg/ml溶液；将PVA溶于水配置成0.01mg/ml的水溶液；将PLGA溶于二氯甲烷配置成20mg/ml溶液；将DOTAP溶于无水乙醇配置成10mg/ml溶液；将DSPC溶于无水乙醇配置成20mg/ml溶液；将Chol溶于无水乙醇配置成10mg/ml溶液，备用；S2、制备PXB纳米粒：取20mg PLGA、200ul丙酮及5mg PXB，于100w冰浴超声6min，超声5s暂停5s；取4ml 0.22um注射器过滤器过滤后的1％PVA水溶液，加入超声后的混合物中；继续于100w冰浴超声6min，超声5s停5s；超声后，37℃减压旋蒸5min至气泡消失，溶液呈珠光色均匀分散，即得PXB纳米粒溶液；S3、制备脂质外膜：根据比...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文妍，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：