抗人肺炎支原体CARDSTX单克隆抗体MM03H制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人肺炎支原体CARDS TX单克隆抗体MM03H，由保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.21420的杂交瘤细胞株制备。目前未见商品化的抗CRADS toxin抗体，更鲜见有针对CARDS TX抗原的ELISA检测试剂盒。本发明专利技术首次公开的抗人肺炎支原体CARDS TX蛋白单克隆抗体MM03H与人肺炎支原体CARDS TX蛋白结合后，可以抑制人肺炎支原体CARDS TX蛋白通过细胞膜进入细胞胞浆。膜进入细胞胞浆。膜进入细胞胞浆。

【技术实现步骤摘要】
抗人肺炎支原体CARDS TX单克隆抗体MM03H


[0001]本专利技术涉及一种单克隆抗体，具体涉及抗人肺炎支原体CARDS TX单克隆抗体MM03H。

技术介绍

[0002]肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP）是社区获得性肺炎的一种常见类型，以学龄儿童及青少年多见。肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）的确切致病机制仍有待进一步阐明。2005年Kannan等人在研究MP和人类表面活性蛋白A的相互作用时，发现了能与表面活性蛋白A结合的约68kD大小的一种蛋白质，后被证实具有细胞空泡毒素作用，作为一种与MP致病直接相关的毒力因子，被命名为MP社区获得性呼吸窘迫综合征毒素（community
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acquired respiratory distress syndrome toxin, CARDS TX）。
[0003]目前发现CARDS TX的主要功能为：具有腺苷二磷酸核糖基转移酶的活性和细胞空泡毒素作用。腺苷二磷酸（ADP）核糖基话包括单
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ADP核糖基化和聚
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ADP核糖基化，而CARDS TX参与单
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ADP核糖基化的过程。Kannan等人利用NAD示踪，用rCARDS TX对CHO细胞进行处理，观察到细胞中的一些蛋白质被ADP核糖化修饰，但这些蛋白如何进一步影响宿主细胞、参与MP致病的具体机制仍有待进一步研究。CARDS TX与CHO细胞共孵育可以引起细胞胞浆空泡化。CARDS TX作用于呼吸道时，可以引起明显的纤毛运动减慢、不同步甚至运动停止、纤毛结构破坏、气道上皮细胞和黏膜下细胞水肿、胞浆空泡、细胞核破碎，最终导致细胞死亡。
[0004]动物实验证实CARDS TX可以引起促炎性细胞因子的升高以及支气管、血管周围炎症细胞的浸润和气道上皮细胞空泡化。CARDS TX作为MP的毒力因子不仅能引起呼吸系统的炎症反应，还能介导呼吸道纤毛运动的减弱、上皮细胞的损伤甚至凋亡，因此CARDS TX在MP的致病因素中占有重要的地位。研究发现BALF（Bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中CARDS TX浓度与肺损伤程度呈正相关，BALF中CARDS TX浓度越高，肺血管和支气管周围淋巴细胞的浸润越严重，同时BALF中IL
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12，IFN
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γ等炎性因子显著升高。同时患儿感染肺炎支原体耐药株的比例上升，部分患儿可发展为难治性肺炎支原体肺炎，此时大环内酯类抗生素往往治疗效果不佳。而CARDS TX作为MP的毒力成分之一，具有较强的免疫原性，因此抗CARDS TX的抗体的研制开发对于肺炎支原体肺炎的预防和治疗具有重要价值。但目前市场上还未见商品化的抗CRADS toxin抗体，更鲜见有针对CARDS TX抗原的ELISA检测试剂盒。因此研制抗人肺炎支原体CARDS TX功能性单克隆抗体对于进一步研究CARDS TX的生物学功能具有重要价值，并为临床治疗肺炎支原体肺炎提供了新的可能。

技术实现思路

[0005]本专利技术的专利技术目的是提供一种抗人肺炎支原体CARDS TX单克隆抗体以及能产生所述抗CARDS TX单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0006]为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Asn Tyr Tyr Gly Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser SerSEQ.ID.NO:2：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQLGNTLTWTFGGGTKLEIK对应于：Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Leu Gly Asn Thr Leu Thr Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys本专利技术还提供了所述单克隆抗体MM03H的编码重链可变区DNA分子序列：SEQ.ID.NO:3；编码轻链可变区DNA分子序列：SEQ.ID.NO:4。
[0014]SEQ.ID.NO:3：caggtgcagctgaaggagtctggacctgagctggtaaagcctggggcttcagtgaagatgtcctgcaaggcttctggatacacattcactagctatgttatgcactgggtgaagcagaagcctgggcagggccttgagtggattggatatattaatccttacaatgatggtactaagtacaatgagaagttcaaaggcaaggccacactgacttcagacaaatcctccagcacagcctacatggagctcagcagcctgacctctgaggactctgcggtctattactgtgcaagatctaattattatggccctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcaSEQ.ID.NO:4：gatattcagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattaggaattatttaaactggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctactacacatcaagattacattcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaactgggtaatacgcttacgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaataaaa本专利技术公开了上述单克隆抗体MM03H在阻挡人肺炎支原体CARDS TX蛋白中的应用；或者在制备检测肺炎支原体CARDS TX表达水平的试剂中的应用。本专利技术的MM03H单抗与常规本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No. 21420。2.由权利要求1所述杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体。3.权利要求2所述单克隆抗体的制备方法，其特征在于，在杂交瘤培养液中接种权利要求1所述杂交瘤细胞株，培养后将培养液分离纯化制备单克隆抗体；或者在动物腹腔内接种权利要求1所述杂交瘤细胞株，将动物腹水液分离、纯化制备单克隆抗体。4. 一种针对CARDS TX抗原的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述单克隆抗体。5. 一种阻断肺炎支原体CARDS TX蛋白的试剂，其特征在于，由权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈正荣，李刚，孙慧明，王婷，
申请(专利权)人：苏州大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：