一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法技术

本发明专利技术涉及农作物病害防治技术领域，具体公开了一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，利用形态特征、培养特征、生理生化特征、DNA特性结合分类鉴别法对W12菌株进行分类鉴定；对W12菌株的发酵产物进行萃取，然后利用皿内抑菌活性法对萃取后部位进行粗略活性测定，进一步利用综合活性测定法对萃取后具有活性部位的W12菌株发酵产物进行综合活性测定；在活性测定过程中利用活性追踪法以及活性筛查法对具有黄芩根腐病抑制作用的W12菌株发酵产物进行快速追踪筛查，进一步得到对黄芩根腐病具有抑制作用的成分。本发明专利技术解决了现有技术中黄芩根腐病防治过程中成本较高、效果较差以及环境污染较严重的技术问题。差以及环境污染较严重的技术问题。差以及环境污染较严重的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法


[0001]本专利技术涉及农作物病害防治
，尤其涉及一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法。

技术介绍

[0002]黄芩是唇形科黄芩多年生草本植物，黄芩药用成分主要为黄芩苷，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效。目前国内许多地区已经对黄芩进行了引种栽培，我省也有大面积种植，仅商洛就有3万亩，栽培黄芩已成为主要商品来源，近年来，随着我省黄芩种植面积逐步扩大，轮作周期缩短，导致黄芩病害逐年加重，其中根腐病已成为影响黄芩产量和品质的主要因素之一。
[0003]黄芩根腐病的防治目前多以化学农药和物理方法为主。物理防治针对黄芩适宜生长环境，避免选择黏土、壤土及盐碱土壤等容易造成植株烂根的土壤类型，但是此方法见效慢且周期长。化学防治多采用药剂防治的方法，如发病初期采用50％甲基托布津1000倍液浇泼病株，但是有效药剂较少，加之中药材的特殊性质和用途，对其病害的防治必需控制农药污染，以保障药材品质和食用安全。中国专利技术专利公开号CN112088739A，公开了一种黄芩根腐病的防治方法，主要包括：(1)农业防治，减少初侵染来源；(2)合理施肥：施足基肥，以有机肥为主，化学肥料为辅，结合移栽前深翻一次性均匀施入土壤；(3)培育健壮无病种苗：选择未种植过黄芩的地块进行育苗，整地时加入防治育苗期黄芩猝倒病、立枯病和地下害虫的农药；选择健壮无病黄芩苗进行移栽；(4)土壤消毒：种植田块进行土壤消毒，覆盖薄膜，种植前翻地，畅通后移栽；(5)化学药剂防治：先开沟，然后在沟里面喷雾施药，每亩地用药量为：15kg清水兑30％噻虫嗪
·
吡蚜酮粉剂15g、3％甲霜
·
噁霉灵水剂10g、0.01％24
‑
表芸苔素内酯可溶液剂10g、1亿CFU/克枯草芽孢杆菌微囊粒剂20g、11％精甲
·
咯
·
嘧菌水剂10ml、5％香芹酚水剂15ml、海矿有机水溶多肽水剂20g，最后定植黄芩苗。
[0004]但上述技术至少存在如下问题：根腐病属于土传病害，其发病部位在植物地下部，隐蔽性强，不易引起注意，往往等到病害爆发药农才采取大剂量农药灌根、喷雾，不规范的防治导致了产品农药残留超标、产品品质下降，不仅成本高、效果差，还造成严重的环境污染。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过提供一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，解决了现有技术中黄芩根腐病防治过程中成本较高、效果较差以及环境污染较严重的技术问题，实现了黄芩根腐病低成本、高效、低污染的防治效果。
[0006]本专利技术提具体包括以下技术方案：
[0007]一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，包括以下步骤：
[0008]步骤S1.利用形态特征、培养特征、生理生化特征、DNA特性结合分类鉴别法对W12菌株进行分类鉴定；
[0009]步骤S2.对W12菌株的发酵产物进行萃取，然后利用皿内抑菌活性法对萃取后部位进行粗略活性测定，进一步利用综合活性测定法对萃取后具有活性部位的W12菌株发酵产物进行综合活性测定；
[0010]步骤S3.在活性测定过程中利用活性追踪法以及活性筛查法对具有黄芩根腐病抑制作用的W12菌株发酵产物进行快速追踪筛查，进一步得到对黄芩根腐病具有抑制作用的成分。
[0011]进一步，所述步骤S1具体包括：
[0012]将W12菌株接种在培养基上进行培养，并在一定时间周期后分别观察所述菌株的形态特征、培养特征、生理化特征及所述菌株的DNA检测结果。
[0013]进一步，所述步骤S1还包括：
[0014]根据所述W12菌株的形态特征、培养特征、生理化特征及所述W12菌株的DNA检测结果构建优化进化树，进一步根据优化进化树完成所述W12菌株的分类鉴定。
[0015]进一步，所述步骤S2具体包括：
[0016]利用综合活性测定法对分类后W12菌株的发酵产物中对黄芩根腐具有抑制作用的活性进行测定，进一步验证W12菌株发酵产物中对黄芩根腐病的抑制性，所述综合活性测定法为综合皿内抑菌活性、组织法、温室盆栽法的活性测定方法。
[0017]进一步，所述步骤S2还包括：
[0018]在综合活性测定法中的皿内抑菌活性法，通过利用W12菌株的特征来定义采集时间差计算生长速率，根据生长速率的大小，进一步测定发酵产物中对黄芩根腐病原菌具有抑制作用成分。
[0019]进一步，所述步骤S3具体包括：
[0020]对W12菌株的发酵产物利用活性追踪法以及活性筛查法进行快速活性追踪筛查，并通过构建自适应活性筛查模型对活性W12菌株产物进行筛查，进行快速追踪筛查，实现对W12菌株发酵产物的系统追踪和筛查，进一步对黄芩根腐病进行防治。
[0021]进一步，所述步骤S3还包括：
[0022]首先对W12菌株的发酵产物采用溶剂分步萃取法，将W12菌株的总提取物分为极性不同的萃取部位，利用步骤S2中皿内抑菌活性法计算生长速率法确定活性部位，运用减压、常压、中压液相色谱(MPLC)和高效制备液相色谱(PR
‑
HPLC)学方法，使用硅胶、D
‑
101大孔吸附树脂、Sephadex LH
‑
20、MCI以及ODS多种填料，对活性部位进行追踪。
[0023]进一步，所述步骤S3还包括：
[0024]自适应活性筛查模型构建如下：
[0025]Model＝{W，μ，b，f，Out}
[0026]其中，W表示提取到的总组分集合，μ表示生长速率，b表示病斑大小参数值，f表示病情指数，Out表示模型输出，即W12菌株发酵产物是保存还是放弃；
[0027]具体计算过程如下：
[0028][0029]σ＝δ{W(s，μ)，ω1}+δ{W(s，b)，ω2}+δ{W(s，f)，ω3}
[0030]其中，Out
s
表示第s类发酵产物组分对应的模型输出，Outs为Out中的任意一个元
素，当输出值为1时表示对W12菌株发酵产物成分进行追踪筛查保存，值为0时表示对W12菌株发酵产物放弃，σ表示判定值，δ{
·
}表示冲激函数，W(s，μ)表示第s类W12菌株发酵产物组分对应的生长速率，W(s，b)表示第s类W12菌株发酵产物组分对应的病斑大小参数值，W(s，f)表示第s类W12菌株发酵产物组分对应的病情指数，ω1、ω2、ω3表示生长速率、病斑大小、病情指数对应的判定阈值。
[0031]本专利技术至少具有如下技术效果或优点：
[0032]1、本专利技术通过利用W12菌株来抑制黄芩根腐病，从源头上减少化学农药对环境和农产品的污染，同时可降低黄芩根腐病防治成本，进一步在对W12菌株进行研究分析得到其特征，并结合W12菌株的DNA特性，构建优化进化树更准确的对菌株进行鉴定分类，为后续W12菌株的研究奠定基础。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1.利用形态特征、培养特征、生理生化特征、DNA特性结合分类鉴别法对W12菌株进行分类鉴定；步骤S2.对W12菌株的发酵产物进行萃取，然后利用皿内抑菌活性法对萃取后部位进行粗略活性测定，进一步利用综合活性测定法对萃取后具有活性部位的W12菌株发酵产物进行综合活性测定；步骤S3.在活性测定过程中利用活性追踪法以及活性筛查法对具有黄芩根腐病抑制作用的W12菌株发酵产物进行快速追踪筛查，进一步得到对黄芩根腐病具有抑制作用的成分。2.根据权利要求1所述的一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：将W12菌株接种在培养基上进行培养，并在一定时间周期后分别观察所述菌株的形态特征、培养特征、生理化特征及所述菌株的DNA检测结果。3.根据权利要求3所述的一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，所述步骤S1还包括：根据所述W12菌株的形态特征、培养特征、生理化特征及所述W12菌株的DNA检测结果构建优化进化树，进一步根据优化进化树完成所述W12菌株的分类鉴定。4.根据权利要求1所述的一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：利用综合活性测定法对分类后W12菌株的发酵产物中对黄芩根腐具有抑制作用的活性进行测定，进一步验证W12菌株发酵产物中对黄芩根腐病的抑制性，所述综合活性测定法为综合皿内抑菌活性、组织法、温室盆栽法的活性测定方法。5.根据权利要求4所述的一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，所述步骤S2还包括：在综合活性测定法中的皿内抑菌活性法，通过利用W12菌株的特征来定义采集时间差计算生长速率，根据生长速率的大小，进一步测定发酵产物中对黄芩根腐病原菌具有抑制作用成分。6.根据权利要求1所述的一种抑制黄芩根腐病原菌的W12发酵产物的活性筛查方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：对W12菌株的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王莉，张昭，王娟，张如，段薇薇，王雅竹，果秋婷，郭鑫，
申请(专利权)人：咸阳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：