一种单克隆抗体及其在检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术一方面公开了一种猪圆环病毒3型单克隆抗体，所述的编码单克隆抗体的的重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，所述的编码单克隆抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还公开了一种用于检测猪圆环病毒3型抗体的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体和有效量的猪圆环病毒3型Cap蛋白；以及对猪圆环病毒3型抗体反应进行检测的检测试剂。本发明专利技术制备的抗猪圆环病毒3型Cap蛋白的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性，适用于制备不同的猪圆环病毒3型诊断试剂。的猪圆环病毒3型诊断试剂。的猪圆环病毒3型诊断试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体及其在检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种单克隆抗体及其在检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)在临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)，呼吸系统和肠道疾病，繁殖障碍，猪皮炎和肾病综合征(PDNS)，猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病主要致病源。
[0003]2016年在美国发生急性死亡并伴有类似猪皮炎和肾病综合征临床症状且表现繁殖障碍的母猪体内分离出一种新型圆环病毒—猪圆环病毒3型(PCV3)
[0004]PCV3是一种新发传染病，区别于PCV2，其基因组结构和蛋白序列存在着显著差异。PCV3与PCV2只是基因组呈圆环状，所以依据这种特征都被命名为圆环病毒。但二者的基因组差异巨大，基因组同源率约为40％。PCV3基因组长2000bp，其主要免疫原性基因Cap基因长645bp；PCV2基因组长1767/1768bp，其主要免疫原性基因Cap基因长701bp，二者Cap基因同源率39％
‑
41％，属于不同蛋白，因此猪免疫了圆环2型疫苗不能阻止圆环3型病毒的感染和繁殖。
[0005]基于以上原因，目前PCV2疫苗以及PCV2的检测方法都不能直接适用于PCV3，因此，急需开发针对PCV3 ORF2基因的特异性研究适合它的检测方法和疫苗。临床上常使用血清学监测的方法了解抗体或者病原在动物体内的分布情况。间接免疫荧光实验和免疫过氧化物酶单层细胞试验操作复杂，成本昂贵，对设备、人员和病毒要求高，不适用于临床大规模检测。ELISA方法不仅可以简便地对猪群感染情况进行监测，还可以用于评价疫苗的免疫效果。所以急需开发一种PCV3 ELISA抗体检测试剂盒。

技术实现思路

[0006]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种猪圆环病毒3型Cap蛋白的单克隆抗体；本专利技术的目的之二，提供一种使用本专利技术制备的Cap蛋白和单克隆抗体制备猪圆环病毒3型抗体检测试剂盒。
[0007]因此，本专利技术一方面公开了一种猪圆环病毒3型单克隆抗体，所述的单克隆抗体能特异性结合猪圆环病毒3型Cap蛋白，所述的编码单克隆抗体的的重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，所述的编码单克隆抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体的重链可变区序列包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述的重链可变区的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3的序列分别为：
[0009]CDR
‑
H1：NYYIT；
[0010]CDR
‑
H2：WIYCGRDGSTKYRDKFKG；
[0011]CDR
‑
H3：ANDYYMFPY；
[0012]所述的单克隆抗体的轻链可变区序列包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3，所述的轻链
可变区的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3的序列分别为：
[0013]CDR
‑
L1：RSSQSIVHSTGNTPYLG；
[0014]CDR
‑
L2：KVSNRFS；
[0015]CDR
‑
L3：FQGQHVPPT。
[0016]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体的重链可变区序列还包含FR
‑
H1、FR
‑
H2、FR
‑
H3和FR
‑
H4，所述的重链可变区的FR
‑
H1、FR
‑
H2、FR
‑
H3和FR
‑
H4的序列分别为：
[0017]FR
‑
H1：VQTLQQSGPDLVGPHASVRISCKASGYQFT；
[0018]FR
‑
H2：WVAQRPGEQGLEWIG；
[0019]FR
‑
H3：PTTLTADKSSTKFISLIGLTSEDSAIMFCSL；
[0020]FR
‑
H4：WGQDTLITVSA；
[0021]所述的单克隆抗体的轻链可变区序列还包含FR
‑
L1、FR
‑
L2、FR
‑
L3和FR
‑
L4，所述的轻链可变区的FR
‑
L1、FR
‑
L2、FR
‑
L3和FR
‑
L4的序列分别为：
[0022]FR
‑
L1：VPKICQSPLHLPVHGGDQASISC；
[0023]FR
‑
L2：WYLQKGGYSPKLLIF；
[0024]FR
‑
L3：GVKDRNSGSGSGTDNTLKISDAARVEAEDLGLYYC；
[0025]FR
‑
L4：FGAGTKLELK。
[0026]再一方面，本专利技术还公开了一种用于检测猪圆环病毒3型抗体的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体和有效量的猪圆环病毒3型Cap蛋白；以及用于猪圆环病毒3型抗体检测的配套试剂。
[0027]优选地，本专利技术所述试剂盒为阻断ELISA抗体检测试剂盒，所述阻断ELISA抗体检测试剂盒包括包被有制备的猪圆环病毒3型Cap蛋白的包被板、HRP标记的单克隆抗体、样品稀释液、25
×
浓缩洗涤液、阳性对照、阴性对照、显色液、终止液。
[0028]优选地，本专利技术所述试剂盒中猪圆环病毒3型Cap蛋白包被浓度为2μg/ml，；所述的HRP标记单克隆抗体的使用稀释比例为1:20000倍。
[0029]本专利技术制备的抗猪圆环病毒3型Cap蛋白的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性，适用于制备不同的猪圆环病毒3型诊断试剂，如胶体金、ELISA等检测试剂盒。
[0030]本专利技术所提供的猪圆环病毒3型阻断ELISA抗体检测试剂盒适用于猪血清中猪圆环病毒3型抗体的检测，其特异性强、灵敏度高、稳定性好、检测速度快，可用于猪圆环病毒3型抗体的早期筛查、免疫评价(有疫苗时适用)以及流行病学调查等。
附图说明
[0031]图1单克隆抗体特异性检测(werstern blot)。其中M是marker，1是PCV3Cap蛋白，2是CSFV，3是PRRSV，4是PRV，5是PCV2。
具体实施方式
[0032]以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒3型单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体能特异性结合猪圆环病毒3型Cap蛋白，所述的编码单克隆抗体的的重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，所述的编码单克隆抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的重链可变区序列包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述的重链可变区的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3的序列分别为：CDR
‑
H1：NYYIT；CDR
‑
H2：WIYCGRDGSTKYRDKFKG；CDR
‑
H3：ANDYYMFPY；所述的单克隆抗体的轻链可变区序列包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3，所述的轻链可变区的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3的序列分别为：CDR
‑
L1：RSSQSIVHSTGNTPYLG；CDR
‑
L2：KVSNRFS；CDR
‑
L3：FQGQHVPPT。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的重链可变区序列还包含FR
‑
H1、FR
‑
H2、FR
‑
H3和FR
‑
H4，所述的重链可变区的FR
‑
H1、FR
‑
H2、FR
‑
H3和FR
‑
H4的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴笛，
申请(专利权)人：广州乐康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：