一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，属于食品生物技术领域。其采用α

【技术实现步骤摘要】
一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法


[0001]本专利技术涉及一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，具体涉及一种通过复合酶酶解提升淀粉样纤维蛋白含量测定准确性的方法，属于食品生物


技术介绍

[0002]淀粉样纤维蛋白是蛋白经加热等加工处理后得到的一种富含交叉β
‑
折叠结构的蛋白聚集体，因其具有高杨氏模量、高拉伸强度、高疏水性、优异的稳定性和界面特性、抗氧化和抗菌活性等性质，可用于改善物质的发泡性能、稳定泡沫和乳液，且可通过形成空间填充网络改良食品的质构特性。因此，淀粉样纤维蛋白在食品行业中的未来应用将有利于推动功能性食品的开发和食品工业的发展。
[0003]目前，据报道牛奶(如β
‑
乳球蛋白和牛血清白蛋白)、鸡蛋(如溶菌酶和卵清蛋白)、豆类(如大豆和豌豆蛋白)和谷类(如水稻、玉米和小麦蛋白)蛋白质经加热均可形成淀粉样纤维蛋白，且在食品典型加工过程如面制品的熟制过程中也发现有淀粉样纤维蛋白的形成。当前研究集中于淀粉样纤维蛋白的形成机制和应用，关于淀粉样纤维蛋白含量测定的研究较少。已报道的关于淀粉样纤维蛋白的测定和提取方法基于淀粉样纤维蛋白难以被蛋白酶降解的特点，利用胰蛋白酶或蛋白酶K降解淀粉样纤维蛋白除外的蛋白质或多肽，进而利用硫黄素T ThT分析淀粉样纤维蛋白的含量，此方法仅适用于纯的蛋白质或多肽体系。食品体系中，含量比例较高的非蛋白质组分和加热等处理过程中组分间相互作用形成的复杂物质均会对含量检测过程中淀粉样纤维蛋白与ThT的结合产生影响，进而影响淀粉样纤维蛋白含量测定的准确性。因此，有必要建立适用于食品体系中淀粉样纤维蛋白含量的测定方法。
[0004]前期研究中发现面条熟制过程中也会形成淀粉样纤维蛋白，且发现淀粉样纤维蛋白的形成与面条品质存在显著的相关性，为系统研究淀粉样纤维蛋白的形成规律及对面条品质的影响，应建立面条体系中淀粉样纤维蛋白含量的测定方法。但是，目前未见相关的研究报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是克服上述不足之处，提供一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，基于面条干基体系中淀粉含量占60％
‑
70％的特点，创造性地利用α
‑
淀粉酶降解面条中的淀粉，并通过组合优化α
‑
淀粉酶、蛋白酶K和胰蛋白酶的添加，建立一种适用于熟制面制品体系的淀粉样纤维蛋白含量测定方法。
[0006]本专利技术的技术方案，一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，采用α
‑
淀粉酶降解冷冻熟面中的淀粉，并通过组合优化α
‑
淀粉酶、蛋白酶K和胰蛋白酶的添加，提升冷冻熟面中淀粉样纤维蛋白含量测定的准确性；具体步骤如下：
[0007](1)原料制备：将冷冻干燥的面条样品粉碎后过筛，收集筛下物；
[0008](2)酶处理：称取冷冻熟面加入叠氮化钠溶液中，然后加入α
‑
淀粉酶至体系酶解；
然后沸水浴，冷却至室温后离心，弃去上清液，收集沉淀物；随后加入蛋白酶K和胰蛋白酶，酶解；冷却至室温后，离心，分别收集上清液SF1和沉淀P1；将P1分散在磷酸钠缓冲液中震荡离心后获得SF2；
[0009](3)ThT荧光分析：依据淀粉样纤维蛋白AFs与硫黄素T ThT特异性结合的特点，将SF1、SF2与ThT在96孔板中混合，在激发和发射波长分别为440和480nm的条件下，测定样品的荧光值，并计算AFs的含量。
[0010]进一步地，步骤(1)中过80
‑
120目筛网。
[0011]进一步地，步骤(2)中添加α
‑
淀粉酶至体系酶活为6
‑
12kEU，添加蛋白酶K和胰蛋白酶至体系酶活分别为20
‑
30EU和16
‑
35kEU。
[0012]进一步地，步骤(2)中α
‑
淀粉酶酶解条件为30
‑
42℃、50
‑
250rpm条件下酶解6
‑
18h。
[0013]进一步地，步骤(2)中蛋白酶K和胰蛋白酶酶解条件为30
‑
42℃、50
‑
250rpm条件下酶解16
‑
30h。
[0014]进一步地，步骤(2)具体如下：
[0015]a、称取含有50
‑
400mg蛋白质的冷冻熟面0.4
‑
5g加入5.0
‑
20.0mL质量体积浓度为0.02％的叠氮化钠溶液中，然后加入α
‑
淀粉酶酶解，沸水浴4
‑
6min，冷却至室温；在4
‑
25℃、4000
‑
8000rpm速度离心5
‑
15min，弃去上清液，收集沉淀物；
[0016]b、加入蛋白酶K和胰蛋白酶酶解；冷却至室温后，在4
‑
25℃、4000
‑
8000rpm速度离心5
‑
15min，分别收集上清液SF1和沉淀P1；
[0017]c、将P1分散在4
‑
12mL的磷酸钠缓冲液中，在15
‑
30℃、50
‑
250rpm速度下震荡8
‑
24h，随后在4
‑
25℃、4000
‑
8000rpm速度离心5
‑
15min，收集上清液SF2。
[0018]进一步地，步骤(2)c中所述磷酸钠缓冲液具体为浓度0.05M、pH 7.0的磷酸钠缓冲液。
[0019]进一步地，步骤(3)中首先将收集到的SF1和SF2进行混合得到混合液；取SF1和SF2的混合液190μL与10μL浓度为200μM的ThT在96孔板中混合。
[0020]进一步地，标准曲线以高度淀粉样纤维化多肽的质量(μg)为横坐标，以样品荧光值为纵坐标，得到的标准曲线为：y＝729.61x
‑
99.63，R2＝0.9998。
[0021]所述方法用于检测冷冻熟面中淀粉样纤维蛋白含量测定。
[0022]本专利技术的有益效果：本专利技术利用α
‑
淀粉酶降解面条中的淀粉，并通过组合优化α
‑
淀粉酶、蛋白酶K和胰蛋白酶的添加，建立一种适用于面制品体系的淀粉样纤维蛋白含量测定方法，为从新视角调控冷冻熟面品质提供了技术支撑，同时为淀粉样纤维蛋白的制备和应用开发提供了新的策略。
附图说明
[0023]图1高度淀粉样纤维化多肽的质量
‑
荧光度标准曲线。
具体实施方式
[0024]以下实施例中的小麦粉购自中粮面业(海宁)有限公司，特制一等中筋面粉，含水3.70％；α
‑
淀粉酶购自北京索莱宝科技有限公司，蛋白酶K、硫黄素T和胰蛋白酶购自上海麦克林生化科技有限公司；多功能酶标仪平台本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是：采用α
‑
淀粉酶降解冷冻熟面中的淀粉，并通过组合优化α
‑
淀粉酶、蛋白酶K和胰蛋白酶的添加，提升冷冻熟面中淀粉样纤维蛋白含量测定的准确性。2.如权利要求1所述的淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是具体步骤如下：(1)原料制备：将冷冻干燥的面条样品粉碎后过筛，收集筛下物；(2)酶处理：称取冷冻熟面加入叠氮化钠溶液中，然后加入α
‑
淀粉酶至体系酶解；然后沸水浴，冷却至室温后离心，弃去上清液，收集沉淀物；随后加入蛋白酶K和胰蛋白酶，酶解；冷却至室温后，离心，分别收集上清液SF1和沉淀P1；将P1分散在磷酸钠缓冲液中震荡离心后获得SF2；(3)ThT荧光分析：依据淀粉样纤维蛋白AFs与硫黄素T ThT特异性结合的特点，将SF1、SF2与ThT在96孔板中混合，在激发和发射波长分别为440和480nm的条件下，测定样品的荧光值，并计算AFs的含量。3.如权利要求1所述淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是：步骤(1)中过80
‑
120目筛网。4.如权利要求1所述淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是：步骤(2)中添加α
‑
淀粉酶至体系酶活为6
‑
12kEU，添加蛋白酶K和胰蛋白酶至体系酶活分别为20
‑
30EU和16
‑
35kEU。5.如权利要求4所述淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是：步骤(2)中α
‑
淀粉酶酶解条件为30
‑
42℃、50
‑
250rpm条件下酶解6
‑
18h。6.如权利要求4所述淀粉样纤维蛋白含量的测定方法，其特征是：步骤(2)中蛋白酶K和胰蛋白酶酶解条件为30
‑
42℃、50
...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁赢，刘玫，王金水，刘豪，陈子璐，宋佳阳，朱秀灵，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：