一种基于水溶性阳离子AIE荧光分子对肝素钠检测的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种水溶性且带正电的的荧光探针TPA

【技术实现步骤摘要】
一种基于水溶性阳离子AIE荧光分子对肝素钠检测的方法和应用


[0001]本专利技术属于医药
，特别是涉及到肝素钠的检测领域，具体是发现一种水溶性、带有正电荷的TPA
‑
3Py分子能够与带负电荷的肝素钠结合后发生聚集，荧光显著增强的现象，利用该现象用于肝素钠检测的专利技术。

技术介绍

[0002]肝素钠作为一种已广泛应用于临床的抗凝剂，用于预防手术和治疗中的血栓形成等疾病，肝素钠的临床使用过程中有出血等副作用，因此对肝素钠的定量监测是非常有必要的。肝素钠是带负电荷最多的一类线性糖胺聚糖，它的负电荷来自于主要双糖单位上的三个磺酸基团和一个羧酸基团。检测肝素钠的荧光探针通常通过其带有的正电荷，静电吸附带负电荷的肝素钠分子，从而导致探针聚集，荧光信号的增强。传统荧光探针与肝素钠结合后，由于聚集会引起ACQ现象，从而降低其检测能力。AIE分子在溶液状态下几乎是非荧光的，但在分析物诱导聚集时会变得强烈发光，从根本上解决ACQ问题，是目前分析检测研究的有力工具。三苯基胺是常用的AIE母核结构，在三苯基胺分子的三个手臂上分别共价连接上三个甲基化的乙烯基吡啶后得到TPA
‑
3Py分子，该分子水溶性强且带有正电荷。本专利技术发现带负电的长链肝素钠能与TPA
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3Py结合，聚集并限制其分子内运动，使其“开启”荧光响应。本专利技术利用这种现象开发TPA
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3Py分子对肝素钠检测的应用。
[0003]查阅相关文献，目前未见利用TPA
‑
3Py分子检测肝素钠含量的方法的相关报导。

技术实现思路

[0004]本专利技术拟提供一种荧光探针，该探针能克服现有技术中用于肝素检测性能上由于聚集引起淬灭(ACQ)现象的不足，采用聚集诱导发光荧光探针开发其对肝素钠检测的应用。
[0005]基于上述目的，本专利技术所涉及的技术方案如下：
[0006]1)选择一种AIE荧光分子：本专利技术选择的是TPA
‑
3Py分子，该分子是在三苯基胺分子的三个手臂上分别共价连接三个甲基化的乙烯基吡啶后得到，具有水溶性且带正电，本专利技术选择TPA
‑
3Py荧光分子具体结构式如下:
[0007][0008]2)考察TPA
‑
3Py的AIE性质：该分子在水溶液中荧光很微弱，但是随着溶液中乙醇
含量的逐渐增加，荧光强度逐渐增大，证明TPA
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3Py的AIE效应。
[0009]3)开发TPA
‑
3Py在肝素检测方面的应用：随着肝素浓度的增加，TPA
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3Py的荧光信号显著增强，肝素钠对TPA
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3Py探针有良好的荧光“开启”响应。具体采用浓度为10μM的TPA
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3Py水溶液检测肝素钠，肝素为0
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12mg/L的7个不同浓度，放置15min后在激发波长462nm处测量最大荧光发射强度，得到肝素钠与最大发射波长下荧光强度的线性关系。线性关系良好，线性方程为y＝0.807x+0.780，R2＝0.9938，线性范围为0
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6.14mg/L。最低检测限为49.53ng/mL，量子产率达4.85％。
[0010]本专利技术具有如下优点：
[0011]对于肝素钠的检测，TPA
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3Py探针表现出较宽的线性范围，较低的最低检测限，以及较高的量子产率。本专利技术荧光探针响应迅速，荧光强度高，信号稳定且灵敏度高，荧光分子结构简单，检测方法简单易行，容易推广。
附图说明
[0012]图1TPA
‑
3Py(8μM)在不同乙醇浓度下的荧光强度光谱图(a)，最大激发波长下荧光强度随乙醇含量增加而增大的结合曲线图(b)λex(TPA
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3Py)＝476nm,slit 2.5/2.5nm
[0013]图2TPA
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3Py(10μM)与不同浓度肝素结合的荧光光谱(a)和线性关系图(b),λex(TPA
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3Py)＝462nm,slit 10/10nm
[0014]图3TPA
‑
3Py(10μM)与Hep(12mg/mL)反应时间影响，λex(TPA
‑
3Py)＝462nm,slit 10/10nm
具体实施方式：
[0015]实施实例
[0016]1、研究TPA
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3Py的AIE性质
[0017](1)TPA
‑
3Py母液配制
[0018]精确称量0.0015g的TPA
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3Py固体粉末至25mL的容量瓶中，用适量去离子水溶解后，再定容至刻度线。得到浓度为66.219μM的AIE
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3溶液
[0019](2)TPA
‑
3Py检测液配制
[0020]取11个1.5mL的离心管，加入TPA
‑
3Py母液0.181mL，然后加入体积为0，0.139，0.278，0.417，0.555，0.694，0.833，0.972，1.110，1.250和1.319mL的无水乙醇，定容至1.5mL。
[0021](3)荧光强度测量
[0022]取上述配制溶液，激发波长476nm，狭缝2.5nm，测量荧光发射强度。TPA
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3Py是水溶性分子，它在水溶液中荧光很微弱，根据图1所示，随着溶液中乙醇组分的逐渐增加，荧光强度逐渐增大。证明在乙醇加入后发生了聚合，TPA
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3Py探针显示出AIE性质。
[0023]2、TPA
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3Py对肝素的检测能力
[0024](1)肝素钠母液配制
[0025]精确称量0.0075g的肝素钠标准品(烟台东诚医药集团有限公司)到100mL的容量瓶中，加入去离子水，溶解后，定容至刻度线，即可得到浓度为75mg/L的肝素钠标准溶液。
[0026](2)肝素检测液配制
[0027]取7个1.5mL的离心管，加入TPA
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3Py母液0.227mL，然后分别加入体积为0，0.04，0.08，0.12，0.16，0.20，0.24mL的肝素钠母液，最后用去离子水定容至1.5mL。
[0028](3)荧光强度测量
[0029]取上述待测溶液室温下避光反应5分钟后，在激发波长462nm处分别测量荧光强度，测量使用的狭缝为10nm。
[0030]如图2所示，TPA
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3Py分子在水溶液中的荧光极其微弱，加入肝素后，TPA
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3Py(10μM)最大发射波长从610nm移动到了645nm，产生了红移，荧光强度明显增强。荧光变化表明，带有负电荷的肝素与带有正电荷的TPA
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3Py分子之间的静电相互作用形成了TPA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光探针，其特征在于该探针能克服现有技术中由于聚集引起淬灭(aggregation
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caused quenching,ACQ)现象，降低其对肝素钠检测能力的不足，开发利用聚集诱导发光(aggregation induced emission,AIE)的荧光探针对肝素钠检测的应用。2.根据权力要求1选择一种AIE荧光分子。根据肝素易溶于水且带负电的性质，选择水溶性且带正电的分子，本发明选择TPA
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3Py荧光分子具体结构式如下:根据权力要求1，其特征在于TPA
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3Py的AIE性质：TPA
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3Py是水溶性分子，在水溶液中荧光很微弱，但是随着溶液中不良溶剂乙醇的逐渐增加，荧光强度显著增大，TPA
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3Py发生AIE效应。3.根据权力要求1，肝素能够诱导TPA
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3Py发生AIE效应：将探针分子溶解在水溶液中，加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜姗姗，齐昀坤，王盛楠，刘晴，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：