一种固定化转氨酶及其在西他列汀制备中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种固定化转氨酶，其为转氨酶固定于固定化载体上所得；所述转氨酶来源于假单胞菌并进行基因改造，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示；所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得。本发明专利技术还公开了其在西他列汀制备中的应用。本发明专利技术以固定化转氨酶作为生物酶催化剂，将针对底物优化的源于假单胞菌基因改造转氨酶固定在经特定修饰的树脂上，避免了全细胞催化分离纯化困难，收率偏低，发酵成本高，发酵三废排放高等缺点，制备西他列汀最高转化率>97％，手性纯度>99.5％，并且固定化转氨酶循环使用次数达到80次以上而没有明显的酶活降低，高手性选择性仍保持不变，有着巨大工业化潜力。有着巨大工业化潜力。有着巨大工业化潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种固定化转氨酶及其在西他列汀制备中的应用


[0001]本专利技术涉及转氨酶
，具体涉及一种固定化转氨酶及其在西他列汀制备中的应用。

技术介绍

[0002]西他列汀(Sitagliptin，见以下结构)是FDA批准的第一个二肽基肽酶
‑
4(DPP
‑
4)抑制剂，用于治疗II型糖尿病。西他列汀通过抑制DPP
‑
4的活性从而提高葡萄糖依赖性促胰岛素释放激素(GIP)和胰高血糖素样肽
‑
1(GLP
‑
1)的水平，后两者可以促进胰岛素的分泌来达到降低血糖的作用。西他列汀相对于传统的口服降糖药相比，具有更好的肠胃耐受性，不易引起低血糖副作用并具有改善脂肪代谢的功能。
[0003][0004]西他列汀的合成方法有化学法和生物酶催化法两种，其中化学法因步骤多，收率低，对环境不友好等诸多负面因素存在，使得其后续前景看低；而生物酶催化法可以一步高效高产率的建立单一手性中心，并且大大降低生产过程中的三废排放，是目前西他列汀绿色工艺改进的热点。目前主流的生物酶催化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶为转氨酶固定于固定化载体上所得；所述转氨酶来源于假单胞菌并进行基因改造，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示；所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得。2.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述树脂为醛基树脂、环氧树脂或氨基树脂。3.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述多聚羟基化合物包括聚丙三醇或聚乙烯醇；所述多聚氨基化合物包括聚乙烯亚胺或聚氨基多肽。4.根据权利要求1所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化载体为树脂经多聚羟基化合物或多聚氨基化合物修饰后醛基化所得，具体包括如下步骤：1质量份的树脂和2
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6体积份的0.2
‑
5wt％多聚羟基化合物水溶液于20
‑
40℃、pH9
‑
10、80
‑
250rpm条件下反应1
‑
32h进行羟基化，得到羟基化树脂；然后羟基化树脂、2
‑
8体积份的0.2
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3wt％次氯酸钠水溶液和2
‑
8体积份的0.2
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3wt％溴化钾水溶液于20
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40℃、80
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250rpm条件下反应1
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24h氧化成醛基化树脂；或1质量份的树脂和2
‑
6体积份的0.2
‑
5wt％多聚氨基化合物水溶液于20
‑
40℃、80
‑
250rpm条件下反应1
‑
32h进行氨基化，得到氨基化树脂；然后氨基化树脂和2
‑
8体积份的0.2
‑
5wt％戊二醛水溶液于20
‑
40℃、pH6
‑
9、80
‑
250rpm条件下反应1
‑
24h转化成醛基化树脂；其中，质量份以g为计量单位时，体积份以mL为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喆明，
申请(专利权)人：杭州濡湜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：