吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法，其是在血浆样品中加入内标工作溶液和乙腈，离心，取所得上清液作为待测血浆样品溶液；对待测血浆样品溶液进行液相色谱分离后，进行质谱分析；所述内标工作溶液为450ng/mL～550ng/mL的吲哚美辛溶液。本发明专利技术的检测方法，可以有效检测吴茱萸汤中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯三种成分在血浆中的浓度，操作简单、分析快速、特异性高、分离度高，可实现对服用吴茱萸汤后体内有效成分及毒性成分的同时监控，对推进吴茱萸汤的进一步研发及安全性研究，极具现实意义。极具现实意义。

【技术实现步骤摘要】
吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，特别是涉及一种吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法。

技术介绍

[0002]吴茱萸汤，中医方剂名。为温里剂，具有温中补虚，降逆止呕之功效，主要成分为吴茱萸。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸的干燥近成熟果实，主要含有的化学成分有生物碱、苦味素、挥发油和黄酮类成分，其中生物碱为其主要活性成分。
[0003]目前，现有文献所报道的主要是应用高效液相色谱法测定吴茱萸汤制剂部分有效成分的含量，体内含量的测定方法仅限于1～2种成分，因仪器灵敏度和提取方法的限制，无法实现对吴茱萸汤体内药代动力学的全面研究。此外，药典记载吴茱萸有小毒，动物试验研究发现，大剂量给予吴茱萸水煎液能造成实验动物明显肝损伤，其机制可能与过氧化损伤、炎性反应因子介导、线粒体损伤、药物
‑
蛋白质加合物的形成等相关。同时检测毒性成分入血后的情况对指导吴茱萸汤制剂的临床应用也是有意义的。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的之一是提供一种吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法，该检测方法操作简单、分析快速、特异性高、分离度高。
[0005]实现上述专利技术目的的具体技术方案包括如下：
[0006]一种吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法，包括以下步骤：
[0007]在血浆样品中加入内标工作溶液和乙腈，离心，取所得上清液作为待测血浆样品溶液；对待测血浆样品溶液进行液相色谱分离后，进行质谱分析；所述内标工作溶液为450ng/mL～550ng/mL的吲哚美辛溶液。
[0008]在其中一些实施例中，所述液相色谱分离中梯度洗脱所采用的流动相B为乙腈，流动相A为质量百分浓度为0.08％～0.12％甲酸水溶液。
[0009]在其中一些实施例中，所述梯度洗脱程序为：
[0010]0.0～0.5分钟，流动相B：50
±
5％
→
50
±
5％；
[0011]0.5～1.0分钟，流动相B：50
±
5％
→
95
±
5％；
[0012]1.0～2.0分钟，流动相B：95
±
5％
→
95
±
5％；
[0013]2.0～2.2分钟，流动相B：95
±
5％
→
50
±
5％；
[0014]2.2～3.0分钟，流动相B：50
±
5％
→
50
±
5％。
[0015]在其中一些实施例中，所述液相色谱的色谱条件包括：
[0016]色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
[0017]流速：0.4mL/min
±
0.05mL/min；
[0018]进样体积：3.00μL
±
0.5μL；
[0019]柱温：40℃
±
5℃；
[0020]自动进样器温度：4℃
±
4℃；
[0021]洗针液：(50
±
5)％乙腈；
[0022]洗冲速度：30μL/sec～40μL/sec；
[0023]洗针液体积：400μL～600μL。
[0024]在其中一些实施例中，所述质谱分析的条件包括：
[0025]离子化模式：电喷雾离子源；正离子模式和负离子模式；多反应监测；
[0026]离子源参数：气帘气：20psi；离子源气体1：30psi；离子源气体2：30psi；
[0027]正离子模式的离子源喷雾电压：5500
±
10V；
[0028]负离子模式的离子源喷雾电压：
‑
4500
±
10V；
[0029]离子源温度：500
±
10℃；
[0030]分辨率Q1/Q3：Unit/Unit；
[0031]碰撞气：Medium；
[0032]暂停时间：20
±
1msec；
[0033]质谱采集时间为3.00
±
0.2min。
[0034]在其中一些实施例中，所述质谱分析中，各成分的四级杆质谱条件为：
[0035]吴茱萸碱：离子对：304.2
→
134.0；去簇电压：30.0V；入口电压：10.0V；出口电压：15.0V；碰撞能量：35.000eV；停留时间：200.0msec；
[0036]吴茱萸次碱：离子对：288.1
→
273.1；去簇电压：30.0V；入口电压：10.0V；出口电压：15.0V；碰撞能量：32.000eV；停留时间：200.0msec；
[0037]吴茱萸内酯：离子对：417.1
→
255.0；去簇电压：30.0V；入口电压：10.0V；出口电压：15.0V；碰撞能量：32.000eV；停留时间：200.0msec；
[0038]吲哚美辛：离子对：358.0
→
139.0；去簇电压：30.0V；入口电压：10.0V；出口电压：15.0V；碰撞能量：24.000eV；停留时间：200.0msec。
[0039]在其中一些实施例中，采用Shimadzu LC 30AD液相色谱仪联合Sciex Qtrap5500质谱仪进行液相色谱分离及质谱分析，所采用的操作系统为Analyst 1.6.3；所采用的液相色谱柱为：ACQUITYBEH C18，Waters。
[0040]在其中一些实施例中，所述乙腈与所述血浆样品的体积比为3～6：1；和/或，所述血浆样品与内标溶液的体积比为1.5～2.5：1；和/或，所述离心温度为3℃～5℃，离心转速为2500rpm～3500rpm，离心时间为8min～12min。
[0041]在其中一些实施例中，所述血浆样品为人或动物的血浆样品。
[0042]在其中一些实施例中，还包括制备标准曲线样本和质控样本的步骤，所述制备标准曲线样本的方法为：在空白血浆中加入混合标准曲线工作溶液；所述制备质控样本的方法为：在空白血浆中加入混合质控工作溶液；所述制备混合标准曲线工作溶液和混合质控工作溶液均包括以下步骤：分别用50
±
5％甲醇水溶液梯度稀释浓度均为1.00mg/mL的吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯标准品储备溶液，即得。
[0043]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0044]在本专利技术中，选择吲哚美辛作为内标物(吲哚美辛极性适中，可以兼顾三种成分的极性，能够较好地对三种化合物起到模拟分析物被基质效应影响的实际情况，更好的抵消其带来的影响)加入待测血浆样本中，再用乙腈沉淀蛋白，经离心取上清进行分析，样本预
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吴茱萸汤中三种成分在血浆中的浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：在血浆样品中加入内标工作溶液和乙腈，离心，取所得上清液作为待测血浆样品溶液；对待测血浆样品溶液进行液相色谱分离后，进行质谱分析；所述内标工作溶液为450ng/mL～550ng/mL的吲哚美辛溶液。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱分离中梯度洗脱所采用的流动相B为乙腈，流动相A为质量百分浓度为0.08％～0.12％甲酸水溶液。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：0.0～0.5分钟，流动相B：50
±
5％
→
50
±
5％；0.5～1.0分钟，流动相B：50
±
5％
→
95
±
5％；1.0～2.0分钟，流动相B：95
±
5％
→
95
±
5％；2.0～2.2分钟，流动相B：95
±
5％
→
50
±
5％；2.2～3.0分钟，流动相B：50
±
5％
→
50
±
5％。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的色谱条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流速：0.4mL/min
±
0.05mL/min；进样体积：3.00μL
±
0.5μL；柱温：40℃
±
5℃；自动进样器温度：4℃
±
4℃；洗针液：(50
±
5)％乙腈；洗冲速度：30μL/sec～40μL/sec；洗针液体积：400μL～600μL。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱分析的条件包括：离子化模式：电喷雾离子源；正离子模式和负离子模式；多反应监测；离子源参数：气帘气：20psi；离子源气体1：30psi；离子源气体2：30psi；正离子模式的离子源喷雾电压：5500
±
10V；负离子模式的离子源喷雾电压：
‑
4500
±
10V；离子源温度：500
±
10℃；分辨率Q1/Q...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷玮，倪庆纯，孙晶晶，彭佳裕，凌珊，戚园梅，周兰华，卢辉，
申请(专利权)人：广州医药研究总院有限公司，
类型：发明
国别省市：