定向培养窖泥功能微生物的方法技术

本发明专利技术属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种高效定向培养窖泥功能微生物的方法。针对现有技术的不足，本发明专利技术提供了定向培养窖泥功能微生物的方法，包括以下步骤：将窖泥悬液接种至微生物培养基中，然后加入太空强化大曲，厌氧条件下恒温培养，获得窖泥培养液。本发明专利技术驯化后的窖泥培养液中细菌、真菌及古菌数量皆显著增加，尤其是Clostridium.spp、Clostridium kluyveri、Methanomicrobiales、Candida等白酒特征组分的主要贡献微生物等显著增加，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
定向培养窖泥功能微生物的方法


[0001]本专利技术属于微生物发酵
，具体涉及一种高效定向培养窖泥功能微生物的方法。

技术介绍

[0002]窖泥是一种含有多种厌氧微生物的发酵粘土，其微生物群落在浓香型白酒风味物质的形成中起着关键作用。然而，窖泥微生物群的自然成熟非常缓慢，需要不间断地驯化数十年以上才能用来酿造高质量的白酒。因此，天然成熟的窖泥数量不能支持中国白酒行业的快速发展。
[0003]自20世纪60年代以来，随着对老窖微生物群落结构及特征风味物质的深入研究，人们开始对人工窖泥培养技术进行了探索。这些技术主要是挖掘老窖泥中的微生物资源，选择使用贴近窖内环境的微生物，如乙酸菌、丁酸菌和己酸菌等功能菌，开发其培养及应用技术。
[0004]目前，以窖泥分离的功能菌株或成熟窖泥，及功能菌株与成熟窖泥组合生产人工窖泥是一种常用技术。采用这种技术生产的窖泥构筑浓香型白酒生产的窖池，仅能有效缩短成熟期。因此，通过太空诱变株强化大曲驯化窖泥以开发人工窖泥培养营造适宜主要功能菌群生长繁殖的环境，提高基酒产率和品质提高等相关研究已引起广泛的关注。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术通过添加太空诱变株强化大曲实现了功能微生物菌群大量富集，拓展了窖泥功能微生物培养技术的研究与应用，为优质人工窖池的开发、针对提升浓香白酒品质的关键技术难题开辟了新的途径。
[0006]本专利技术提供了定向培养窖泥功能微生物的方法，包括以下步骤：
[0007]将窖泥悬液接种至微生物培养基中，然后加入太空强化大曲，厌氧条件下恒温培养，获得窖泥培养液。
[0008]其中，所述窖泥的窖龄为50
‑
100年。优选地，所述窖泥的窖龄为100年。
[0009]其中，所述窖泥悬液接种到微生物培养基的接种比为5
‑
15v/v％。即窖泥悬液占整个窖泥悬液和培养基总和的体积比。
[0010]其中，所述窖泥悬液是将窖泥加入无菌生理盐水，分散混匀后所得；其中，窖泥接种到无菌生理盐水的接种量为5
‑
20w/v％。接种量指的是窖泥相对无菌生理盐水的质量与体积比。
[0011]其中，所述太空强化大曲接种量为0.2
‑
0.5w/v％。
[0012]其中，所述微生物培养基配方为：每升培养基中含有170mL盐溶液A、170mL盐溶液B、5g NaHCO3、1g酵母浸粉、1g蛋白胨、3g葡萄糖、0.2g半胱氨酸盐酸盐，115℃灭菌30min，冷却后加0.001g刃天青；其中所述盐溶液A组成为0.3v/v％KH2PO4、0.6v/v％NaCl、0.3v/v％(NH4)2SO4、0.03v/v％CaCl2、0.03v/v％MgSO4；盐溶液B为0.3v/v％K2HPO4。
[0013]其中，所述微生物培养基中黄水的添加比例为10
‑
20v/v％。
[0014]其中，所述太空强化大曲为太空诱变株强化大曲粉，其诱变株为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，保藏编号为：CGMCC NO.20675。
[0015]其中，所述恒温培养的温度为30
‑
40℃，培养时间为5
‑
20天。
[0016]有益效果：本专利技术将优质窖泥微生物添加至含黄水的特制微生物培养基中，于厌氧条件下培养，通过添加太空诱变株强化大曲(诱变的菌株为Bacillus licheniformis，保藏编号为CGMCC 20675，接种初始浓度2
×
105/g～6
×
105/g)，对50年以上窖泥培养物的群落结构进行定向扰动，实现了功能微生物的扩培。驯化后的窖泥培养液中细菌、真菌及古菌数量皆显著增加，尤其是Clostridium.spp、Clostridium kluyveri、Methanomicrobiales、Candida等白酒特征组分的主要贡献微生物。
[0017]现有技术中，以窖泥分离的功能菌株或成熟窖泥，及功能菌株与成熟窖泥组合生产人工窖泥是一种常用技术，采用这种技术生产的窖泥构筑浓香型白酒生产的窖池，仅能有效缩短成熟期，而本专利技术采用太空诱变株强化所得大曲，省略优质窖泥功能菌株分离及再重构繁琐步骤，且效果较好，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0018]图1为本专利技术试验例和实施例中窖泥培养液微生物群落组成：PM：原始窖泥，DZ：未加入太空强化大曲窖泥培养液，S：加入太空强化大曲窖泥培养液(A和C分别是门水平的细菌、真菌群落组成；B和D分别是属水平的细菌、真菌群落组成；AT丰富类群；MT中等类群；RT稀少类群。
[0019]图2为本专利技术实施例中不同窖泥培养液有机酸含量差异图；DZ：未加入太空强化大曲窖泥培养液，S：加入太空强化大曲窖泥培养液。
[0020]太空诱变株为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，保藏编号为CGMCC NO.20675。保藏时间为2020年09月18日，保藏中心为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编为100101。分类命名为：地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了一种高效定向培养窖泥功能微生物的方法，通过添加太空强化大曲，对窖泥中的功能菌群进行扩培。以太空诱变后的大曲对窖泥微生物群进行扰动并定向驯化，为优质人工窖池的开发，提升浓香白酒品质的关键技术开辟了新的途径。
[0022]本专利技术方法包括如下步骤：称取50年
‑
100年窖龄的窖泥加入无菌生理盐水，将充分分散混匀后所得窖泥悬液接种至特制的微生物培养基中，加入太空强化大曲，于厌氧条件下恒温培养，培养一段时间后得到适用于开发人工窖泥的窖泥培养液。
[0023]优选地，所述窖泥的窖龄为100年。
[0024]其中，所述窖泥悬液接种到微生物培养基的接种比为5
‑
15v/v％。即窖泥悬液占整个窖泥悬液和培养基总和的体积比。
[0025]其中，窖泥接种到无菌生理盐水的接种量为5
‑
20w/v％。接种量指的是窖泥相对无菌生理盐水的质量与体积比。
[0026]其中，所述微生物培养基配方为：每升培养基中含有170mL盐溶液A、170mL盐溶液B、5g NaHCO3、1g酵母浸粉、1g蛋白胨、3g葡萄糖、0.2g半胱氨酸盐酸盐，115℃灭菌30min，冷却后加0.001g刃天青；其中所述盐溶液A组成为0.3v/v％KH2PO4、0.6v/v％NaCl、0.3v/v％(NH4)2SO4、0.03v/v％CaCl2、0.03v/v％MgSO4；盐溶液B为0.3v/v％K2HPO4。
[0027]其中，所述微生物培养基中黄水的添加比例为10
‑
20v/v％。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：包括以下步骤：将窖泥悬液接种至微生物培养基中，然后加入太空强化大曲，厌氧条件下恒温培养，获得窖泥培养液。2.根据权利要求1所述的定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：所述窖泥的窖龄为50
‑
100年；优选地，所述窖泥的窖龄为100年。3.根据权利要求1所述的定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：所述窖泥悬液接种到微生物培养基的接种比为5
‑
15v/v％。4.根据权利要求1所述的定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：所述窖泥悬液是将窖泥加入无菌生理盐水，分散混匀后所得；其中，窖泥接种到无菌生理盐水的接种量为5
‑
20w/v％。5.根据权利要求1所述的定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：所述太空强化大曲接种量为0.2
‑
0.5w/v％。6.根据权利要求1所述的定向培养窖泥功能微生物的方法，其特征在于：所述微生物培养基配方为：每升培养基中含有170mL盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘淼，张宿义，林锋，秦辉，杨艳，
申请(专利权)人：泸州老窖股份有限公司，
类型：发明
国别省市：