一种用于检测粮食中赤拟谷盗及其碎片与虫卵的试剂盒和方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测粮食中赤拟谷盗及其碎片与虫卵的试剂盒和方法，属于生物技术领域。该试剂盒包含以下成分：(1)引物对；引物对由上游引物和下游引物组成，上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；(2)荧光探针；荧光探针中包含SEQ ID No.3所示的序列。本发明专利技术提供的试剂盒和检测方法可快速、简便、特异性且灵敏地检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵，以及鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵，应用前景广阔。应用前景广阔。应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测粮食中赤拟谷盗及其碎片与虫卵的试剂盒和方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测粮食中赤拟谷盗及其碎片与虫卵的试剂盒和方法。

技术介绍

[0002]国家粮食安全是实现经济发展、社会稳定、国家安全的基础。建立粮食安全保障体系，保障粮食供给和质量安全，是维护国家安全的重要任务之一。原粮及成品粮的安全储藏是整个粮食安全体系重要基础。粮食在贮藏期间极易受到赤谷拟盗、玉米象、麦蛾、谷蠹等贮粮害虫的危害。在粮食出入库的过程中引起的库区内尘杂飞扬，为害虫的传播和蔓延提供了便利，加重了粮食品质下降。据统计，每年由储粮害虫造成的粮食损失约占总储粮量的十分之一，累计损失金额近20亿。
[0003]赤拟谷盗是西南地区储粮害虫中的优势虫种。赤拟谷盗是鞘翅目拟步甲科的昆虫，主要危害的粮食为小麦粉，常见寄生于小麦、玉米、稻谷、高粱、油料、干果、豆类等粮食作物。一方面，该虫有臭腺分泌臭液，使面粉发生霉腥味而不堪食用；另一方面，该虫的分泌物在含有致癌物苯醌，不慎摄入会危害人体健康。赤拟谷盗每次产卵量达300
‑
1000粒左右，其在面粉、小麦、玉米等粮食作物的缝隙处产卵，卵粒微小，上附有粉末碎屑，一般不易看清。因此，开发出能够有效检测出粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵的方法，以及鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵的方法具有重要意义。
[0004]目前用于检测赤拟谷盗碎片的技术主要为浮选法、近红外光谱法和太赫兹时域光谱法，其中浮选法直接观察，不易判定害虫种类和密度，不能检测隐蔽性害虫；近红外光谱法精度低；太赫兹时域光谱法仪器昂贵，技术成本高，不适合推广应用。目前用于检测赤拟谷盗虫卵的技术主要有染色法、几丁质法、尿酸法免疫学检测法以及DNA图谱分析技术。前述方法中，染色技术和包括几丁质法、尿酸法在内的生化鉴定技术存在操作繁琐，直观检测不易判断密度的缺陷；免疫学检测法依赖抗体的品质，灵敏度较低；DNA图谱分析技术是一种结合PCR扩增技术和琼脂糖凝胶电泳技术，利用通用引物对检测样本中害虫的方法，存在以下问题：(1)无法直接对物种进行准确鉴定；(2)鉴定虫种还需要进行测序，技术成分高，操作较复杂；(3)检测时间较长(4小时)；(4)需要PCR反应后处理，容易导致交叉污染和假阳性。
[0005]为了克服上述问题，继续开发出一种可快速、简便、特异性且灵敏地检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵的方法，以及鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一个目的在于提供一种检测试剂盒，及其用于检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵，用于鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷
盗虫卵的用途。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供一种检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的方法。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种用于鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的方法。
[0009]本专利技术提供了一种检测试剂盒，它包含以下成分：
[0010](1)引物对；
[0011]引物对由上游引物和下游引物组成，上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；
[0012](2)荧光探针；
[0013]荧光探针中包含SEQ ID No.3所示的序列。
[0014]进一步地，所述荧光探针中，SEQ ID No.3所示的序列的3
’
端连接有荧光淬灭基团，5
’
端连接有荧光报告基团，所述荧光淬灭基团优选为MGB，荧光报告基团优选为FAM。
[0015]MGB是Minor Groove Binder.Taqman的简称；FAM是6
‑
carboxy
‑
fluorescein的简称，指6
‑
羧基荧光素。
[0016]进一步地，所述检测试剂盒还包含以下成分：
[0017](3)阳性对照；
[0018]阳性对照为赤拟谷盗的总DNA。
[0019]进一步地，所述检测试剂盒还包含以下成分：
[0020](4)空白对照；
[0021](5)阴性对照。
[0022]本专利技术还提供了一种检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的方法，所述方法包括以下步骤：
[0023](a)提取待测粮食的总DNA；
[0024](b)以待测粮食的总DNA为模板，采用上述的检测试剂盒进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果显示阳性扩增曲线，则待测粮食中含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵；如果不显示阳性扩增曲线，则待测粮食中不含赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵。
[0025]进一步地，所述粮食为谷类、薯类、豆类、油料类、干果类中的一种或两种以上，所述谷类优选为小麦、大麦、玉米、稻谷、高粱中的一种或两种以上。
[0026]本专利技术还提供了一种鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的方法，所述方法包括以下步骤：
[0027](i)提取待鉴定样本的总DNA；
[0028](ii)以待鉴定样本的总DNA为模板，采用上述的检测试剂盒进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果显示阳性扩增曲线，则待鉴定样本是赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片或赤拟谷盗虫卵；如果不显示阳性扩增曲线，则待鉴定样本不是赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和赤拟谷盗虫卵。
[0029]进一步地，所述待鉴定样本为昆虫、昆虫碎片或昆虫虫卵。
[0030]进一步地，所述昆虫为贮粮害虫。
[0031]“阳性扩增曲线”指阳性对照显示的扩展曲线。
[0032]“总DNA”指生物体总的DNA，可以用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取得到。
[0033]本专利技术还提供了上述的检测试剂盒用于检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的用途。
[0034]本专利技术还提供了上述的检测试剂盒用于鉴别赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的用途。
[0035]本专利技术首次以SEQ ID No.4所示赤拟谷盗COX1基因MN888508.1序列为模板序列设计出了特定的引物对和荧光探针，该引物对和荧光探针组合能从粮食混合储粮害虫、碎片及虫卵的样品总DNA中高效特异扩增出一段较短的赤拟谷盗特异性基因片段：SEQ ID No.4所示赤拟谷盗COX1基因MN888508.1。通过检测该赤拟谷盗COX1基因MN888508.1，不仅能够检测出粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵，还能够鉴别出赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵。
[0036]与现有的检测方法相比，本专利技术的检测方法具有以下有益效果：
[0037]1.本专利技术为非直接观察法，无染色或者其他生化鉴定流程，避免了操作繁琐、不易判断密度的缺陷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，其特征在在于：它包含以下成分：(1)引物对；引物对由上游引物和下游引物组成，上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；(2)荧光探针；荧光探针中包含SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在在于：所述荧光探针中，SEQ ID No.3所示的序列的3
’
端连接有荧光淬灭基团，5
’
端连接有荧光报告基团，所述荧光淬灭基团优选为MGB，荧光报告基团优选为FAM。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述的检测试剂盒，其特征在在于：它还包含以下成分：(3)阳性对照；阳性对照为赤拟谷盗的总DNA。4.一种检测粮食中是否含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：(a)提取待测粮食的总DNA；(b)以待测粮食的总DNA为模板，采用权利要求1
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3任一项所述的检测试剂盒进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果显示阳性扩增曲线，则待测粮食中含有赤拟谷盗、赤拟谷盗碎片和/或赤拟谷盗虫卵；如果不显示阳性扩增曲线，则待测粮食中不含赤拟谷盗、赤拟谷盗碎...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙婉玲，王立博，柳雅珍，邓莉，常薇，李玉宝，
申请(专利权)人：四川省轻工业研究设计院有限公司，
类型：发明
国别省市：