一种测序文库的构建方法、构建测序文库的试剂盒及基因测序方法技术

本发明专利技术属于基因测序领域，公开了一种测序文库的构建方法、构建测序文库的试剂盒及基因测序方法。测序文库的构建方法：将第一片段固定在芯片的微孔中；将第二片段与第一片段杂交，延伸并扩增，得第一捕获片段；将第三片段与第一捕获片段杂交，延伸并扩增，得第二捕获片段；用第二捕获片段捕获复合体，复合体包括靶DNA和转座体；去除转座酶，得复合序列，延伸，即得测序文库。试剂盒包括：芯片，固定在芯片微孔中的第二捕获片段；转座酶和转座子。测序方法：利用上述方法构建测序文库，扩增，测序。该测序文库的构建方法，操作简单，成本大幅下降，易于后期与自动化平台结合。后期与自动化平台结合。后期与自动化平台结合。

【技术实现步骤摘要】
一种测序文库的构建方法、构建测序文库的试剂盒及基因测序方法


[0001]本专利技术属于基因测序领域，具体涉及一种测序文库的构建方法、构建测序文库的试剂盒及基因测序方法。

技术介绍

[0002]二代测序技术以其高通量、高准确率和低成本的特点，极大地改变了基因测序在生物和医学领域的研究和临床应用，然而二代测序技术由于其读长相对较短，一般最长可以读取300～500bp，因此在检测基因组结构变异、基因组基因定相等领域无法很好地开展。目前常采用测序方案是：将一个有10万～100万级别碱基的长片段DNA，在一个限定的区域内打断并添加单一种类的DNA标签和接头，而不同的长片段DNA在不同的限定区域分别打断并添加各自不同种类的标签和相同的接头，之后再测序。如果某部分DNA的序列的标签相同，在测序结果中可自动判定来自某一区域，可以先进行小区域少量的DNA组装，然后再进行整体的组装，这能够产生更长的组装序列，从而解决二代测序在基因组定相和结构变异中面临的问题。这种带有相同DNA标签的基因序列被称为关联的短片段(linked reads)。/>[0003]基于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：提供芯片和第一片段，所述芯片上具有若干微孔，所述第一片段包括P1序列，将所述第一片段固定在所述微孔中；S2：提供第二片段，所述第二片段包括P1互补序列、第一随机序列N1和P2序列，将所述第二片段与所述第一片段杂交；延伸并扩增所述第一片段，得到固定在所述微孔中的第一捕获片段；S3：提供第三片段，所述第三片段包括P2序列、第二随机序列N2和P3序列，将所述第三片段与所述第一捕获片段杂交；延伸并扩增所述第一捕获片段，得到固定在所述微孔中的第二捕获片段；S4：利用所述第二捕获片段捕获复合体，所述复合体包括靶DNA和结合在所述靶DNA上的转座体，所述转座体包括转座酶和转座子，所述转座子包括部分P3序列、全部P3序列、部分P3互补序列中的任一种；S5:去除所述转座酶，得复合序列，所述复合序列包括部分转座子序列和片段化的靶DNA，延伸所述复合序列，得延伸产物，所述延伸产物即为所述测序文库。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中还包括将测序引物固定在所述微孔中。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S4中需先提供第四片段，所述第四片段包括P3序列，将所述第四片段与所述第二捕获片段杂交；所述第二捕获片段通过所述第四片段捕获所述复...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘广丽，李改玲，刘二凯，
申请(专利权)人：深圳赛陆医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：