一种样本保存液、试剂及保存样本的方法技术

本发明专利技术公开了一种样本保存液、试剂及保存样本的方法，涉及生物工程技术领域。其包括：稳定剂、灭活剂、缓冲剂和水，稳定剂选自甜菜碱，灭活剂选自氯己定和阳离子表面活性剂中的一种或者至少两种的混合物。本发明专利技术提供的样本保存液能降低待检样本的传染和降解风险，能有效灭活病原微生物。甜菜碱是一种两性表面活性剂，具有良好的灭菌效果，且与灭活剂配合，可以协同提升灭菌效果。协同提升灭菌效果。

【技术实现步骤摘要】
一种样本保存液、试剂及保存样本的方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体而言，涉及一种样本保存液、试剂及保存样本的方法。

技术介绍

[0002]传统的病原微生物检测方法主要包括形态学检测、微生物培养、涂片镜检、抗原抗体检测和核酸检测，这些方法也仍然在临床上广泛应用，然而这些临床实验室检测方法由于其自身方法学的原因存在不同的局限性。随着分子生物学技术的发展，病原分子诊断被逐渐应用于临床。
[0003]病原宏基因组测序(metagenomics next generation sequencing，mNGS)是一种不依赖于培养、也无需预设病原，直接从患者感染病灶部位标本中提取核酸，实现病原体种属鉴定的高通量测序技术。与传统临床的实验室检测方法相比，病原mNGS是基于核酸水平对病原微生物的核酸序列进行检测，它可以突破不同病原体类型的局限性，无偏向性的全面覆盖数千甚至上万种的病原体，同时鉴定细菌、真菌、病毒、结核和寄生虫等多种类型病原微生物。
[0004]由于待检样本含有一定的病原微生物，在采集后由于一些客观条件，需要进行保存和运输，存在一定的传染和降解风险，因此开发一种有利于保存且能有效灭活病原微生物的保存液势在必行。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种样本保存液、试剂及保存样本的方法以便于保存和运输待检样本，本专利技术提供的样本保存液能降低待检样本的传染和降解风险，能有效灭活病原微生物。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种样本保存液，其包括：稳定剂、灭活剂、缓冲剂和水，稳定剂选自甜菜碱，灭活剂选自氯己定和阳离子表面活性剂中的一种或者至少两种的混合物。
[0009]甜菜碱是一种两性表面活性剂，具有良好的灭菌效果，且与灭活剂配合，可以协同提升灭菌效果。而且甜菜碱和灭活剂在较低的浓度下就能有效地杀灭微生物细胞，故优选它们。此外，为进行微生物细胞的灭活处理，氯己定和阳离子表面活性剂可以单独使用或，如果需要的话，将其中两个或多个组合在一起混合使用。
[0010]缓冲剂用于调节样本保存液的pH。
[0011]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述样本保存液中甜菜碱的浓度为1
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10％(w/v)；浓度太低时，就无法达到预期的灭活微生物细胞的有效效果。另一方面，如果其浓度太高就会引起例如处理后的废液处理、工业用酶的失活等问题，因此考虑到所使用的微生物
细胞的稳定性，专利技术人对甜菜碱的最适浓度进行了筛选，发现在上述浓度范围下既可以有效灭活微生物细胞，还可以维持
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20℃～4℃下的样本的稳定性，尤其是
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20℃和4℃下的样本稳定性。
[0012]例如样本保存液中甜菜碱的浓度为1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％或10％。
[0013]在一种可选的实施方式中，样本保存液中甜菜碱的浓度为5
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10％(w/v)。在上述浓度下，在
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20℃，4℃下样本保存液具有良好的保存效果，样本的稳定性良好，且灭活效果良好。
[0014]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述样本保存液中灭活剂的浓度为0.01
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0.1％(w/v)。
[0015]在使用离子表面活性剂的时候，在灭活处理时添加高浓度的该溶液可能会引起微生物细胞的细菌裂解、破裂和聚集。添加低浓度的该表面活性剂是有效的。
[0016]在一种可选的实施方式中，样本保存液中灭活剂的浓度为0.05
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0.1％(w/v)。略微增大样本保存液中灭活剂的浓度有助于提升样本保存液的灭活效果。
[0017]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述阳离子表面活性剂为季铵化合物。
[0018]在一种可选的实施方式中，季铵化合物包括不限于：苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯索氯铵、西吡氯铵、十二烷基二甲基苯氧乙基溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵中的至少一种。
[0019]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述缓冲剂选自磷酸盐缓冲液；
[0020]在一种可选的实施方式中，磷酸盐缓冲液选自磷酸氢二钠溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钾溶液或磷酸二氢钾溶液。
[0021]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述样本保存液的pH为6.5
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8.0。专利技术人证实，样本保存液的pH对于样本液的稳定性影响不大，但对于灭活效果影响较为明显。在上述pH条件下具有良好的灭活效果。
[0022]在一种可选的实施方式中，样本保存液的pH为7.0
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8.0时，具有更优的灭活效果。
[0023]在一种可选的实施方式中，样本保存液的pH为7.5
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7.8时，具有更优的灭活效果。
[0024]在一种可选的实施方式中，样本保存液的水为灭菌注射用水。
[0025]在一种可选的实施方式中，样本为血液、血清、血浆或尿液。
[0026]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述样本保存液包括：浓度为1～10％的甜菜碱，浓度为0.01～0.05％的氯己定，其余为灭菌注射用水，用缓冲剂调节样本保存液的pH为7.5。在该条件下，样本保存液的灭活效果良好，添加样本保存液后的样本液的稳定性较好。
[0027]在一种可选的实施方式中，样本保存液包括：浓度为1～10％的甜菜碱，浓度为0.01～0.1％的季铵化合物，其余为灭菌注射用水，用缓冲剂调节样本保存液的pH为7.5。在该条件下，样本保存液的灭活效果良好，添加样本保存液后的样本液的稳定性较好。
[0028]在一种可选的实施方式中，样本保存液包括：浓度为1～10％的甜菜碱，浓度为0.01～0.05％的氯己定，浓度为0.01～0.05％的季铵化合物，其余为灭菌注射用水，用缓冲剂调节样本保存液的pH为7.5。
[0029]第二方面，本专利技术还提供了一种试剂或试剂盒，试剂或试剂盒含有上述的样本保存液。本专利技术提供的样本保存液可以用于检测试剂或试剂盒。
[0030]第三方面，本专利技术还提供了一种样本液，其包括样本和上述的样本保存液。
[0031]第四方面，本专利技术还提供了一种保存样本的方法，其包括如下步骤：将待保存的样本与上述的样本保存液混合。
[0032]在一种可选的实施方式中，在
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20℃～4℃下进行样本的保存。如
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20℃～
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4℃下保存。
[0033]本专利技术具有以下有益效果：
[0034]本专利技术提供的样本保存液能降低待检样本的传染和降解风险，能有效灭活病原微生物。甜菜碱是一种两性表面活性剂，具有良好的灭菌效果，且与灭活剂配合，可以协同提升灭菌效果。而且甜菜碱和灭活剂在较低的浓度下就能有效地杀灭微生物细胞。此外，为进行微生物细胞的灭活处理，氯己定和阳离子表面活性剂可以单独使用或将其中两个或多个组合在一起混合使用。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样本保存液，其特征在于，其包括：稳定剂、灭活剂、缓冲剂和水，所述稳定剂选自甜菜碱，所述灭活剂选自氯己定和阳离子表面活性剂中的一种或者至少两种的混合物。2.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液中所述甜菜碱的浓度为1
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10％(w/v)；优选地，所述样本保存液中所述甜菜碱的浓度为50％(w/v)。3.根据权利要求1或2所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液中所述灭活剂的浓度为0.01
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0.1％(w/v)；优选地，所述样本保存液中所述灭活剂的浓度为0.05
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0.1％(w/v)。4.根据权利要求3所述的样本保存液，其特征在于，所述阳离子表面活性剂为季铵化合物；优选地，所述季铵化合物选自：苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯索氯铵、西吡氯铵、十二烷基二甲基苯氧乙基溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵中的至少一种。5.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述缓冲剂选自磷酸盐缓冲液；优选地，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸氢二钠溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钾溶液或磷酸二氢钾溶液。6.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液的pH为6.5
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8.0；优选地，所述样本保存液的pH为7.0
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘一岚，缪晓娟，帅燕容，
申请(专利权)人：中国人民解放军西部战区总医院，
类型：发明
国别省市：