一种多花黄精的遗传转化方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种多花黄精的遗传转化方法及应用，涉及遗传转化技术领域。本发明专利技术以毛状根为媒介的高效遗传转化体系，利用含有工程菌菌液侵染多花黄精外植体，获得了转基因毛状根，侵染过程简单易学，结果高效直观，能够稳定获得多花黄精转基因毛状根。利用本发明专利技术所述遗传转化方法，在最优条件下可将诱导率提高至88.8％，可应用于多花黄精的基因功能验证。可应用于多花黄精的基因功能验证。可应用于多花黄精的基因功能验证。

【技术实现步骤摘要】
一种多花黄精的遗传转化方法及应用


[0001]本专利技术属于遗传转化
，具体涉及一种多花黄精的遗传转化方法及应用。

技术介绍

[0002]多花黄精(又名姜形黄精，Polygonatum cyrtonema Hua)，百合科黄精属多年生草本植物，为历版《中国药典》收载的3种基源黄精药材之一。多花黄精种子自然条件下难以萌发，目前尚无影响多花黄精种子萌发的关键基因遗传转化体系。
[0003]毛状根(hairy roots)又称发状根，是指利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染植物后，其Ri质粒的转移脱氧核糖核酸(T
‑
DNA)整合到植物细胞核基因组，使植物合成冠瘿碱之后产生的许多不定根。发根农杆菌中的Ri质粒经过改造修饰后，其T
‑
DNA片段区可以将目标基因插入宿主植物的基因组中，即可产生转基因毛状根。由于毛状根具有生长迅速、周期短且不需要外源植物激素、合成次生代谢物质能力强且稳定等优点，因此被广泛应用于药用植物的基础研究，为实现药用植物次生代谢产物的工业化生产提供了广本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多花黄精的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：将目标基因转化至发根农杆菌中，利用含乙酰丁香酮的1/2MS液体培养基进行重悬，得侵染液；以多花黄精的小球茎为外植体，对所述外植体进行表面划伤和深层戳伤，而后置于所述侵染液中；侵染结束后，吸取表面菌液，接种至含乙酰丁香酮的1/2MS固体培养基中进行共培养，将在共培养过程中形成的含菌斑的外植体进行除菌培养；将除菌培养后诱导出来的毛状根剪下，经筛选后得到转基因毛状根。2.根据权利要求1所述遗传转化方法，其特征在于，所述发根农杆菌的菌株包括A4、ATCC15834或LBA9402。3.根据权利要求1所述遗传转化方法，其特征在于，所述1/2MS液体培养基中乙酰丁香酮的浓度为50～150μmol/L。4.根据权利要求1所述遗传转化方法，其特征在于，所述外植体的制备方法，包括将在4℃沙藏两个月的多花黄精种子，接种在萌发培养基中进行暗培养两个月。5.根据权利要求4所述遗传转化方法，其特征在于，所述萌发培养基以MS培养基为基础培养基，还包括1mg/L 6
‑
BA和0.5mg/LNAA。6.根据权利要求1所述遗传...

【专利技术属性】
技术研发人员：金青，彭甫蕾，张文武，夏龙，刘林，蔡永萍，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：