一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，具体是采用二极管阵列检测器，以0.1%甲酸溶液

【技术实现步骤摘要】
一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法


[0001]本专利技术涉及一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，属于药物分析检测领域。

技术介绍

[0002]他达拉非，化学名为(6R
‑
12aR)
‑6‑
(1，3
‑
苯并二恶茂
‑5‑
基)
‑2‑
甲基
‑
2，3，6，7，12，12a
‑
六氢化吡嗪并[1'，2'
‑
1，6]‑
吡啶并[3，4
‑
b]吲哚
‑
1，4
‑
二酮，为白色结晶性粉末，难溶于水。英文通用名为Tadalafil，商品名有：Cialis（希爱力）、西力士、犀利士等。其结构式如下：。
[0003]他达拉非是美国爱克斯和礼来公司共同开发的环磷酸鸟苷（cGMP）特异性磷酸二酯酶5（PDE5）的选择性、可逆性抑制剂，属于第二代磷酸二酯酶抑制剂，它通过竞争性抑制cGMP和PDE5结合，使PDE5失活，减少cGMP的水解，使cGMP浓度升高达到勃起功能增强的作用。
[0004]顺式四氢咔啉盐酸盐是合成他达拉非的关键中间体，其化学名为顺式
‑
（1R，3R）
‑
1，2，3，4
‑
四氢
‑1‑
（3，4
‑
亚甲二氧基苯基）
‑
9H
‑
吡啶并[3，4
>‑
B]吲哚
‑3‑
羧酸甲酯盐酸盐，其结构式如下： HCl顺式四氢咔啉盐酸盐的合成路线如下：
其可能产生的杂质如下：杂质1（D
‑
色氨酸）；杂质2（胡椒醛）；杂质3（D
‑
色氨酸甲酯盐酸盐）；杂质4（水解杂质）；杂质5（异构体杂质）。
[0005]如何快速准确的检测出顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质情况，是控制他达拉非的产品质量的关键。

技术实现思路

[0006]针对现阶段他达拉非合成过程中存在的中间体质量控制的问题，本专利技术提供了一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，采用二极管阵列检测器对他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐进行有关物质检查的测定方法。
[0007]本专利技术的技术方案如下：一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，包括以下步骤：（1）色谱条件：检测器采用二极管阵列检测器，柱温40℃，流速1.0mL/min。色谱条件的流动相A为0.1%甲酸溶液；流动相B为乙腈，梯度洗脱；理论塔板数按顺式四氢咔啉盐酸盐峰计算不低于3000；（2）供试品溶液的制备：取顺式四氢咔啉盐酸盐适量，加溶剂配制成溶液，作为供试品溶液；（3）测定方法：取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法处理色谱图。
[0008]优选地，所述步骤（1）的梯度洗脱的条件为：。
[0009]优选地，所述步骤（1）的液相色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶。
[0010]优选地，所述步骤（2）的溶剂为：水：乙腈的体积比为1：1。
[0011]本专利技术他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐的有关物质检测方法，适用于顺式四氢咔啉盐酸盐产品检测及其反应液的监控，可以有效的控制顺式四氢咔啉盐酸盐的质量。
[0012]本专利技术的积极效果在于： 1、本专利技术使用二极管阵列检测器对本品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价色谱峰纯度的有效方法: 可直观的判断色谱峰的纯度，并判断存在干扰峰的位置，能够获得“在流”的全部光谱信息，快速得到色谱组分的吸收光谱，二极管阵列检测器较一般的紫外
‑
可见检测器，优点在于不仅能依靠色谱的保留时间进行定性，而且能够根据其提供的光谱信息进行定性，大大提高了定性的可信度。
[0013] 2、本专利技术检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足有关物质检查，保证产品质量，在工作中实用性强。
附图说明
[0014]图1为顺式四氢咔啉盐酸盐及有关物质的液相色谱图。
具体实施方式
[0015]一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，包括以下步骤：1.色谱条件的选择：仪器：安捷伦:1260II，其最佳柱温40℃，流速1.0ml/min。液相色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250mm
×
4.6mm，5
µ
m），先后选用甲醇
‑
水、乙腈
‑
水、甲醇
‑
水
‑
三氟乙酸、甲醇
‑
乙腈
‑
磷酸盐缓冲液溶液等多种条件，最终确定流动相由0.1%甲酸溶液
‑
乙腈组成，按下表进行线性梯度洗脱；进样量20
µ
l。
[0016]在该色谱条件下，顺式四氢咔啉盐酸盐主峰保留时间适中，峰形较好。
[0017]2.供试品溶液的制备：取顺式四氢咔啉盐酸盐适量，加水/乙腈（1：1）配制成0.4mg/ml的溶液，作为供试品溶液。
[0018]3.测定方法：取供试品溶液20
µ
l注入液相色谱仪，记录色谱图至顺式四氢咔啉盐酸盐主峰保留时间的2倍，按面积归一化法处理色谱图，其杂质总和不超过2%。
[0019]实施例2专属性试验精密称取本品、D
‑
色氨酸、D
‑
色氨酸甲酯盐酸盐、胡椒醛、水解杂质和异构体杂质各适量，置同一量瓶中，加溶剂使溶解并定量稀释制成每1ml中含顺式四氢咔啉盐酸盐0.4mg的混合溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1），结果表明，顺式四氢咔啉盐酸盐与杂质之间分离情况良好，杂质之间分离情况良好。
[0020]D
‑
色氨酸的相对保留时间为0.24；胡椒醛的相对保留时间为0.93；D
‑
色氨酸甲酯盐酸盐的相对保留时间为0.34；水解杂质的相对保留时间为0.87；异构体杂质相对保留时间为1.05。
[0021]实施例3灵敏度测定精密称取顺式四氢咔啉盐酸盐10.44mg，置25ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液2.5ml，置50ml量瓶中，精密量取0.2ml置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为检出限浓度溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.0829μg/ml，约相当于供试液浓度的0.02%。结果证明，该方法灵敏度高，可以充分满足有关物质检查测定的要求。
[0022]实施例4耐用性试验取中间体Ⅱ供试品溶液作为耐用性试验溶液，以供试品溶液中主峰色谱纯度及主峰与相邻杂质峰的分离度为指标，分别对柱温、流速、流动相中三氟乙酸浓度进行耐用性考察。结果如下：表1耐用性试验结果（流速）
表2耐用性试验结果（柱温）表3耐用性试验结果（甲酸浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种他达拉非中间体顺式四氢咔啉盐酸盐有关物质的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）色谱条件：检测器采用二极管阵列检测器，柱温40℃，流速1.0mL/min；色谱条件的流动相A为0.1%甲酸溶液；流动相B为乙腈，梯度洗脱；理论塔板数按顺式四氢咔啉盐酸盐峰计算不低于3000；（2）供试品溶液的制备：取顺式四氢咔啉盐酸盐适量，加溶剂配制成溶液，作为供试品溶液；（...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延娜，刘玉波，刘文涛，李新志，
申请(专利权)人：山东省医药工业设计院有限公司，
类型：发明
国别省市：