一种发酵虫草菌粉(Cs-4)中虫草酸含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵虫草菌粉(Cs

【技术实现步骤摘要】
一种发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)中虫草酸含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种虫草酸含量的检测方法，属于生物样品检测
，特别是涉及一种发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)中虫草酸含量的检测方法。

技术介绍

[0002]发酵虫草菌粉是从新鲜冬虫夏草[Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.]中分离所得的虫草菌
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蝙蝠蛾拟青霉(Cs
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4)经深层发酵培养，将发酵产物过滤，干燥而成。现代药理研究表明，虫草酸具有抑制各种病菌的成长以及预防与治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞、长期衰竭等疾病的作用，在临床应用上是良好的利尿剂，具有降低颅内压、眼内压等功效。发酵虫草菌粉的市场需求量逐年增加，仅2021年发酵虫草菌粉的销量已达到3089.158吨，销售额高达3.96亿元，但目前发酵虫草菌粉仅有江西的地方标准，且缺少关于虫草酸成分的检测，导致市场上发酵虫草菌粉质量良莠不齐。
[0003]发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)中含有虫草酸、腺苷、麦角甾醇、氨基酸等多种生物活性物质。虫草酸是发酵虫草菌粉主要有效成分之一，现有的发酵虫草菌粉(Cs
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4)地方标准仅规定了腺苷、鸟苷、尿苷及麦角甾醇的含量范围，缺少对虫草酸含量的要求。
[0004]目前，关于发酵虫草菌粉有效成分含量测定研究的相关文献较少，近十年来仅有不到10篇，且主要研究的是多糖类、核苷类及甾醇类物质的含量测定。虫草酸又名D
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甘露醇，市场上常把甘露醇与其混用；但研究发现，D
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甘露醇与甘露醇构型不一致，不能以甘露醇的测定方法作为检测虫草酸的标准。
[0005]现有文献暂时没有关于发酵虫草菌粉(Cs
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4)虫草酸含量测定的研究，仅有3篇涉及虫草酸异构体甘露醇的含量测定。现有文献对虫草酸含量测定的研究主要集中在虫草药材，关于发酵虫草菌粉及其制剂中虫草酸的检测方法均是以其异构体甘露醇为测定目标，主要有滴定法、比色法、HPLC
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RID检测法等。
[0006]目前，有少部分已公开的文献报道了发酵虫草菌粉中虫草酸异构体甘露醇的检测方法，如：发酵虫草菌粉制品中甘露醇的测定
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《职业卫生与病伤》2005第3期、HPLC
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RID测定发酵虫草菌粉(Cs
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4)中甘露醇的含量
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《药品评价》2020、发酵虫草菌粉中甘露醇含量的比色法测定
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《中国现代应用药学》2006第6期。
[0007][0008]近年来，关于发酵虫草菌粉(Cs
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4)有效成分含量测定研究的相关文献较少，仅有不到10篇关于发酵虫草菌粉(Cs
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4)有效成分含量测定的研究，且主要集中在核苷类成分及甾醇类成分。由于缺少发酵虫草菌粉(Cs
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4)中虫草酸含量测定的相关研究，导致了发酵虫
草菌粉(Cs
‑
4)的检测标准不完善。现有的发酵虫草菌粉(Cs
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4)地方标准的含量检测项仅规定了腺苷、鸟苷、尿苷及麦角甾醇的含量，只有薄层鉴别项目涉及虫草酸异构体甘露醇的鉴定，无法对虫草酸进行定量。虫草酸作为发酵虫草菌粉(Cs
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4)的主要成分之一，一直缺乏相关的质量标准，导致了市场上发酵虫草菌粉(Cs
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4)产品质量不稳定。
[0009]现有的中药材及饮片中虫草酸的测定方法主要有高碘酸盐氧化法、旋光法、比色法、比重法、滴定法、HPLC
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RID检测法等。旋光法、比色法、高碘酸盐氧化法等常规含量测定方法虽然操作简便，但结果准确度不高，且仅适用于高纯度的样品测定，发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)成分较为复杂，因此，无法使用上述常规含量测定方法。
[0010]现有文献中发酵虫草菌粉及其制剂中虫草酸的检测方法主要有滴定法、比色法、HPLC
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RID测定法等。虫草酸为含6个羟基的多元醇，由于氧化还原滴定法测定的是具有还原羟基的成分所消耗滴定液之总和，并非为甘露醇单一成分的实际含量，因此使用滴定法测定虫草酸的含量不准确。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的提供一种发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)中虫草酸含量的检测方法，所述含量测定方法为超高效液相色谱
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蒸发光检测器法，具有灵敏度高、定量精度高、检测速度快、样品少等优点。
[0012]本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种发酵虫草菌粉(Cs
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4)中虫草酸含量的检测方法，包括以下步骤：
[0013]S1，对照品溶液的制备：取虫草酸对照品适量，精密称定，加纯水溶解，得到对照品溶液；
[0014]S2，供试品溶液的制备：取发酵虫草菌粉适量至锥形瓶中，精密称定，加入纯水，称定重量，超声提取，放冷，称重，用纯水补足减失重量，滤过，滤液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
[0015]S3，测定：将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行检测，测定得到色谱图，根据色谱图计算虫草酸的含量；
[0016]其中，色谱条件如下：色谱柱Waters BEH Amide，流动相以甲醇为A相、水为B相，进行梯度洗脱。
[0017]优选地，本专利技术发酵虫草菌粉(Cs
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4)中虫草酸含量的检测方法，步骤如下：
[0018]S1，对照品溶液的制备：取虫草酸对照品适量，精密称定，加纯水溶解，制成每1mL含虫草酸1
‑
5mg的对照品溶液。
[0019]S2，供试品溶液的制备：取发酵虫草菌粉适量至锥形瓶中，精密称定，加入纯水25mL，称定重量，超声或加热回流提取15～60min，放冷，称重，用纯水补足减失重量，滤过，滤液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0020]S3，测定：将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行检测，测定得到色谱图，根据色谱图计算虫草酸的含量。
[0021]优选地，本专利技术发酵虫草菌粉(Cs
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4)中虫草酸含量的检测方法，色谱条件如下：
[0022]色谱柱Waters BEH Amide，色谱柱柱长100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm，以甲醇为流动相A，水为流动相B，0～40min(A：10％
→
100％，B：90％
→
0％)，流速为0.20
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0.40ml/
min，进样量为1
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2μl，柱温为20
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40℃，蒸发光检测器蒸发温度为45
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80℃，载气(N2)流量为2.5
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2.7L/min。
[0023]优选地，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵虫草菌粉(Cs
‑
4)中虫草酸含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，对照品溶液的制备：取虫草酸对照品适量，精密称定，加纯水溶解，得到对照品溶液；S2，供试品溶液的制备：取发酵虫草菌粉适量至锥形瓶中，精密称定，加入纯水，称定重量，超声提取，放冷，称重，用纯水补足减失重量，滤过，滤液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；S3，测定：将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行检测，测定得到色谱图，根据色谱图计算虫草酸的含量；其中，色谱条件如下：色谱柱Waters BEH Amide，流动相以甲醇为A相、水为B相，进行梯度洗脱。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤S1中，对照品溶液的制备：取虫草酸对照品适量，精密称定，加纯水溶解，制成每1mL含虫草酸1
‑
5mg的对照品溶液。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤S2中，供试品溶液的制备：取发酵虫草菌粉适量至锥形瓶中，精密称定，加入纯水25mL，称定重量，超声或加热回流提取15～60min，放冷，称重，用纯水补足减失重量，滤过，滤液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：色谱条件如下：色谱柱Waters BEH Amide，色谱柱柱长100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm，以甲醇为流动相A，水为流动相B，0～40min(A：10％
→
100％，B:90％...

【专利技术属性】
技术研发人员：马恩耀，周劲松，杨诗慧，刘奇越，范伟兵，罗文英，孔箭，
申请(专利权)人：甘肃广药白云山中药科技有限公司广州采芝林药业有限公司，
类型：发明
国别省市：