一种用于检测CRISPR-Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
更具体地，涉及一种用于检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是原核生物基因组内的一段重复序列。为了将病毒的外来入侵基因清除，细菌进化出了CRISPR
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Cas系统，以此抵抗病毒的浸染。CRISPR
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Cas系统存在于大多数细菌与所有的古菌中，自其被发现以来，CRISPR
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Cas系统在临床应用、基础研究或者分析检测方面都体现出了极大的前景。
[0003]为了更好地利用CRISPR
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Cas系统，优化CRISPR
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Cas系统，提高Cas蛋白的活性和递送是当前的研究热点。另由于CRISPR<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.在所用报告细胞的管家基因的终止密码子前插入绿色荧光蛋白与分泌型纳米荧光素酶的融合表达基因，筛选成功定点插入融合表达基因的单克隆细胞；S2.利用带筛选标记的慢病毒载体将萤火虫荧光素酶基因随机插入步骤S1所得单克隆细胞的基因组，筛选含萤火虫荧光素酶活性的单克隆细胞，培养得到用于检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S1所述报告细胞为HEK293细胞，所述管家基因为ACTG1。3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S1所述绿色荧光蛋白为增强型的绿色荧光蛋白，所述纳米荧光素酶的N端含有分泌信号肽，绿色荧光蛋白和纳米荧光素酶之间含有可以剪切的linker。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S2利用带嘌呤霉素N
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乙酰转移酶基因的慢病毒载体将萤火虫荧光素酶基因随机插入步骤S1所得单克隆细胞的基因组，用嘌呤霉素筛选含萤火虫荧光素酶活性的单克隆细胞。5.权利要求1～4任一所述制备方法制备所得用于检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性的双荧光素酶报告细胞系。6.权利要求5所述细胞系在检测CRISPR
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Cas蛋白切割活性、评估CRISPR
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Cas蛋白在细胞内切割动力、筛选CRISPR
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Cas蛋白突变体或筛选CRISPR
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Cas蛋白调控剂中的应用。7.权利要求5所述细胞系在制备检测CRISPR
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【专利技术属性】
技术研发人员：松阳洲，杨悦，何梓彬，马文宾，梁普平，陈昱僖，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：