【技术实现步骤摘要】
一种用于小麦四种常见病毒的多重PCR检测引物及其应用
[0001]本专利技术属于植物病毒检测
，具体地说，涉及一种用于小麦四种常见病毒的多重PCR检测引物及其应用。
技术介绍
[0002]小麦（Triticum aestivum L.）是我国重要的战略储备粮食品种，我国是是世界上最大的小麦生产国及消费国，小麦生产对我国粮食安全具有重要意义。小麦在整个生长过程中，常常会遭到多种病毒病的复合侵染，病毒病防治困难，其流行和暴发对小麦生产为害极大。
[0003]目前针对小麦病毒病的检测与鉴定有很多种方法，并且其检测与鉴定的方法正朝着方便、高效、快捷、准确的方向不断发展和改进。主要有电镜技术检验方法，分子生物学鉴定方法，血清学检验方法。其中常规的分子生物学鉴定方法具有准确、高效的优点，而相较于其他常规分子检测方法，多重PCR可以检测出侵染小麦的多种病毒，即在同一个PCR反应中加入所有待检病毒的特异性引物，可以同时扩增不同病毒的基因片段，从而同时检测多种病毒。与单一PCR方法相比，该方法可以降低污染风险，节省时间以及降低成...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于小麦四种常见病毒的多重PCR检测引物，其特征在于：所述的多重PCR检测引物包括用于检测小麦黄花叶病毒的引物、用于检测小麦梭条花叶病毒的引物、用于检测中国小麦花叶病毒的引物及用于检测小麦线条花叶病毒的引物；所述的用于检测小麦黄花叶病毒的引物如下：其上游引物WYMV
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CP
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R序列如SEQ ID NO.1所示，其下游引物WYMV
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CP
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F序列如SEQ ID NO.2所示；所述的用于检测小麦梭条花叶病毒的引物如下：其上游引物WSSMV
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CP
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R序列如SEQ ID NO.3所示，其下游引物WSSMV
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CP
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F序列如SEQ ID NO.4所示；所述的用于检测中国小麦花叶病毒的引物如下：其上游引物CWMV
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CP
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R序列如SEQ ID NO.5所示，其下游引物CWMV
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CP
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F序列如SEQ ID NO.6所示；用于检测小麦线条花叶病毒的引物如下：其上游引物WSMV
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CP
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R序列如SEQ ID NO.7所示，其下游引物WSMV
‑
CP
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F序列如SEQ ID NO.8所示。2.一种如权利要求1所述的多重PCR检测引物在小麦黄花叶病毒、小麦梭条花叶病毒、中国小麦花叶病毒及小麦线条花叶病毒检测中的应用。3.根据权利要求2所述的多重PCR检测引物在小麦黄花叶病毒、小麦梭条花叶病毒、中国小麦花叶病毒及小麦线条花叶病毒检测中的应用，其特征在于：提取待测样品的总RNA作为模板，接着进行cDNA第一链的合成，利用多重PCR检测引物进行RT
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PCR反应，取RT
‑
PCR反应扩增产物进行检测。4.根据权利要求3所述的多重PCR检测引物在小麦黄花叶病毒、小麦梭条花叶病毒、中国小麦花叶病毒及小麦线条花叶病毒检测中的应用，其特征在于：所述的总RNA的提取方法如下：（1）液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50
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100 mg细粉转入裂解液的离心管，剧烈振荡20s，充分裂解；（2）12500 rpm，14500
×
g，离心5
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10 min，沉淀不能裂解的碎片；（3）取上清转到1.5 mL离心管,加入上清0.5倍体积的无水乙醇，吹打混匀；（4）将混合物加入一个吸附柱中，具体为吸附柱放入收集管中，12000 rpm，13400
×
g离心2 min，弃掉废液；（5）加350μL去蛋白液，室温放置1 min，12000 rpm离心30 s，弃掉废液；（6）向吸附柱中央加入50μL的DNase I，室温放置15 min；（7）向吸附柱中加入350μL去蛋白液，12,000 rpm，13,400
×
g离心30 s，弃废液，将吸附柱放回收集管中；（8）加入500μL漂洗液，12,000 rpm，13,400
×
g离心30 s，重复一次；（9）取出吸附柱，放入一个RNase Free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜...
【专利技术属性】
技术研发人员：严丹侃，马超，王芳，陈莹，韩科雷，胡淑珍，李婷，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所，
类型：发明
国别省市：
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