一种去内毒素的质粒提取方法和试剂盒技术

本发明专利技术的去内毒素的质粒提取方法和试剂盒，在中和沉淀液中加入了多聚磷酸，执行步骤S3时：“加入中和沉淀液，离心后提取上清液，得到含内毒素的质粒上清液”，在所得到的含内毒素的质粒上清液中，质粒就被多聚磷酸保护着，这样在加入去内毒磁珠，对溶液中的内毒素进行吸附去除时，就可以减少因为在去内毒磁珠处理并吸附内毒素的时候，也会吸附质粒，而造成的质粒损失，从而增加经过去除内毒素处理后的质粒得率，实现在温和的条件下对质粒中内毒素的去除处理，既不会损失太多质粒，又不会影响质粒的生物活性。粒的生物活性。粒的生物活性。

【技术实现步骤摘要】
一种去内毒素的质粒提取方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物实验
，具体涉及一种去内毒素的质粒提取方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]在生物医学的许多研究中，尤其是基因治疗和DNA疫苗在癌症﹑单基因遗传病﹑心血管疾病等疾病的诊断和治疗方面，插入核酸信息成为了必要步骤。而作为基因传递工具，质粒可以携带要插入的核酸信息，例如一个通过基因重组技术生成的目的DNA片段。质粒被细胞吞噬后，就将携带的核酸信息导入到生物体细胞的遗传物质中，再由生物体细胞进行繁殖和表达，合成所需要的蛋白质。细菌质粒是重组技术中最常用的载体之一。
[0003]因此，在分子生物学研究中，质粒提取和纯化就成为了许多实验中的重要环节。但是，在许多分子生物学及药学相关研究中，用于表达和生成质粒的细胞是含有内毒素(endotoxin)成分的。内毒素是革兰氏阴性菌细胞外壁层的脂多糖类物质(lipopolysaccharides, LPS)，是一种脂多糖
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蛋白质的复合物，分子量从几千到几万，在水中能够形成缔合物，相对分子质量可达400,000...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去内毒素的质粒提取方法，其特征在于，接种培养含有目的质粒的菌群，离心去除上清液，得到菌群沉淀，对所述菌群沉淀，依次执行以下步骤：S1. 向所述菌群沉淀中加入悬浮液，将细胞悬浮；S2. 加入裂解液，裂解细胞膜后得到溶解有质粒的菌体裂解液；S3. 加入中和沉淀液，离心后提取上清液，得到含内毒素的质粒上清液；S4. 向所述质粒上清液中加入去内毒磁珠，震荡后磁吸，导出无内毒素的质粒上清液；S5. 向所述无内毒素的质粒上清液中加入磁珠悬浮液，磁吸后收集磁珠，所述磁珠为含质粒磁珠；S6. 向所述含质粒磁珠中加入漂洗液，磁吸固定并收集漂洗后的含质粒磁珠；S7. 向所述含质粒磁珠中加入洗脱液，释放并回收所述质粒；其中，所述中和沉淀液包括多聚磷酸。2.一种去内毒素的质粒提取试剂盒，其特征在于，包括悬浮液、裂解液、中和沉淀液、漂洗液、洗脱液、磁珠悬浮液，还包括去内毒磁珠；其中，所述中和沉淀液包括盐酸胍和乙酸钾，并使用叶酸调节为酸性；所述中和沉淀液还包括多聚磷酸；所述悬浮液包括Tris和EDTA，并使用NaOH调节为碱性；所述裂解液包括NaOH和SDS；所述漂洗液包括乙醇；所述洗脱液为包括Tris和EDTA的缓冲液或纯净水；所述磁珠悬浮液为包括粒径50~100nm的磁性纳米微球的悬浮液；所述去内毒磁珠包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，邹燕，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：