一种可自组装成胶的重组类胶原蛋白及其制备方法与应用技术

一种可自组装成胶的重组类胶原蛋白及其制备方法与应用，属于生物工程技术领域。为了解决现有细菌类胶原蛋白需要经复杂的改性方法才能制备一定强度的水凝胶，进而限制其在生物医药方面应用的问题，本发明专利技术基于化脓链球菌Scl2.28的特征和主要功能序列重新优化设计获得了一种重组类胶原蛋白，该类胶原蛋白不但具有胶原蛋白的特性，而且不需要经过化学、物理及高分子材料共混等复杂的改性方法，仅通过调整pH值就能迅速自组装成一定强度的水凝胶，还可利用光化学交联的方式来获得物理性能更好的水凝胶。本发明专利技术获得的重组类胶原蛋白在医学应用和组织工程等方面具有更加广阔的应用价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种可自组装成胶的重组类胶原蛋白及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种可自组装成胶的重组类胶原蛋白及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是动物体内最丰富的蛋白质。经过数十年的研究，人们至少发现28种不同类型的胶原蛋白。尽管这些胶原蛋白的生物功能和物理特性差异巨大，但均具有特征性的三重螺旋结构。该结构由3条α肽链以右手螺旋的方式形成，每条α肽链又由重复的Gly
‑
Xaa
‑
Yaa序列组成，这样的三股螺旋区域被称为胶原区域。在Xaa和Yaa位置上的氨基酸通常为脯氨酸，Yaa位置的脯氨酸被翻译后修饰为羟脯氨酸(Hyp)，从而增强三螺旋结构的稳定性。这些结构特征决定胶原蛋白具有良好的物理和生物学特性，使其在食品、医学、化工以及生物材料等领域有着广泛的应用(CN105285645A、CN106806942A、CN104878473A、CN1556715A)。
[0003]在过去的几十年中，胶原蛋白作为生物医用材料在医疗产品和临床中发挥着重要作用(CN10566本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可自组装成胶的重组类胶原蛋白，其特征在于，所述重组类胶原蛋白是在scl2类胶原蛋白的基础上将胶原区域替换为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5任一所示的氨基酸序列，将非胶原区域替换为SEQ ID No.6所示的氨基酸序列后获得的；所述scl2类胶原蛋白的GeneID：110660。2.一种权利要求1所述重组类胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)根据化脓链球菌(Streptococcuspyogenes)Scl2.28的cDNA序列，合成重组的Scl2的全序列，并以合成后的全序列为模板PCR扩增合成DNA片段，再经酶切、连接、转化大肠杆菌获得Scl2蛋白重组表达载体；(2)将步骤(1)获得的Scl2蛋白重组表达载体转化至大肠杆菌中获得阳性菌株；(3)将步骤(2)获得的阳性菌株于LB培养基中培养至OD
600
达到0.4～0.6时，向菌液中加入IPTG，继续培养5h～6h，对菌液进行离心或过滤后，去除上清并收集菌体沉淀；(4)向步骤(3)获得的菌体中加入蛋白提取液和溶菌酶，于冰上静置1h，获得蛋白溶液，经超声后，通过离心或过滤收集上清获得粗蛋白；(5)利用已装镍的重力柱对步骤(4)获得的粗蛋白进行纯化，经水透析后获得重组后的类胶原蛋白。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述PCR扩增使用的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述酶切是将扩增后的DNA片段及Pet28a空载体经过NcoI和XhoI限制性内切酶进行双酶切；所述连接使用的连接酶为T4DNA连接酶；所述转化利用的大肠杆菌为DH5α。5.一种权利要求1所述重组类胶原蛋白的自组装成胶方法，其特征在于，将重组类...

【专利技术属性】
技术研发人员：高存钢，孙粤，年锐，牟汝华，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：