一种巨噬细胞纳米颗粒复合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种巨噬细胞纳米颗粒复合物及其制备方法与应用，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物为巨噬细胞通过N3

【技术实现步骤摘要】
一种巨噬细胞纳米颗粒复合物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于纳米材料领域，具体涉及一种巨噬细胞纳米颗粒复合物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]癌症是当今威胁人类健康的主要疾病之一。近年来提出的近红外光介导的光热治疗，能够对肿瘤组织进行定点清除并且对正常组织具有较低的毒副作用，为肿瘤的治疗提供了新的方法。纳米材料在生物医学方面的应用和研究是纳米科技的一个十分重要方面。研究纳米技术在生命医学上的应用，可以在纳米尺度上比较清楚认识生物大分子的精细结构及相应功能的关系，获取生命信息或物质。
[0003]巨噬细胞是肿瘤微环境的重要组成部分，在血管生成、细胞外基质重塑、癌细胞增殖、转移和免疫抑制以及对化疗药物的耐药性和检查点阻断免疫治疗中发挥作用。适当激活时，巨噬细胞可以介导癌细胞的吞噬和细胞毒性肿瘤杀伤，并与先天性和适应性免疫系统的组成部分进行有效的双向相互作用。因此，它们已成为癌症治疗中的治疗靶点。巨噬细胞本身的吞噬能力很强，易于与药物结合，这些特点为单核
‑
巨噬细胞成为药物载体提供了可能。但药物直接与单核巨噬细胞结合时有时会出现载药量过低、药物提前释放和药物活性被细胞影响等问题。因此，修饰巨噬细胞表面，为巨噬细胞纳入新的功能是迫切需要的。
[0004]相关技术有采用正电荷纳米颗粒吸附于巨噬细胞表面来修饰巨噬细胞表面，但是正负电荷吸附为非共价连接，在复杂溶液环境中容易脱落；也有通过马来酰亚胺基团和巨噬细胞上的巯基偶联以实现对巨噬细胞的选择性修饰，但是新生成的C
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S键在生理条件下稳定性不足，会发生逆迈克尔加成，在有竞争性的巯基化合物(例如半胱氨酸)时更不稳定。因此，仍然亟需新的对巨噬细胞表面的修饰方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种巨噬细胞纳米颗粒复合物，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物连接稳定，特异性好。
[0006]本专利技术还提出一种上述巨噬细胞纳米颗粒复合物的制备方法。
[0007]本专利技术还提出一种上述巨噬细胞纳米颗粒复合物的应用。
[0008]根据本专利技术的一个方面，提出了一种巨噬细胞纳米颗粒复合物，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物为巨噬细胞通过N3
‑
DBCO连接纳米颗粒得到。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物的粒径为130
‑
180nm。
[0010]根据本专利技术的第二方面，提出了一种巨噬细胞纳米颗粒复合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
[0011]S1、在巨噬细胞表面修饰叠氮基团；
[0012]S2、制备纳米颗粒：将疏水性多聚物溶于第一溶剂，得到第一混合溶液，将吲哚菁绿、卵磷脂和含有二苯并环辛炔的磷脂类物质溶解于第二溶剂得到第二混合溶液，将第一
混合溶液逐滴加入到第二混合溶液中，超声3
‑
8min，得到纳米颗粒；
[0013]S3、将步骤S1制备得到的表面修饰叠氮基团巨噬细胞与步骤S2制备得到的纳米颗粒进行连接，制备得到巨噬细胞纳米颗粒复合物。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述巨噬细胞为人源巨噬细胞。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述在巨噬细胞表面修饰叠氮基团包括以下步骤：诱导巨噬细胞极化，将极化的巨噬细胞加入引入叠氮基团的糖分子进行孵育即得。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述糖分子包括甘露糖胺盐酸盐、葡萄糖胺盐酸盐或半乳糖胺盐酸盐、四乙酰甘露糖、四乙酰半乳糖、乙酰唾液酸和四乙酰葡萄糖中的至少一种。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述引入叠氮基团的糖分子为四乙酰基
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N
‑
叠氮乙酰甘露糖胺。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述巨噬细胞的培养采用含有5
‑
15％FBS的培养基。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述培养基为RPMI
‑
1640培养基。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述巨噬细胞的培养条件为在30
‑
40℃，含有2
‑
7％CO2的环境下进行培养3
‑
7d。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，在诱导巨噬细胞极化前还包括诱导巨噬细胞分化的步骤，诱导分化的试剂采用佛波酯或集落刺激因子进行。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述佛波酯(PMA)的浓度为80
‑
120ng/mL。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述诱导细胞极化的培养液包括脂多糖、IFN
‑
γ和PMA。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述脂多糖的含量为80
‑
120ng/mL。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述IFN
‑
γ的含量为10
‑
30ng/mL。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述佛波酯的浓度为80
‑
120ng/mL。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述孵育的时间为40
‑
50h。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述疏水性多聚物选自聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(又称聚乙交酯丙交酯)、聚乳酸和聚己内酯的至少一种。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述疏水性多聚物为聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(简写为PLGA)。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述含有二苯并环辛炔的磷脂类物质包括磷脂聚乙二醇二苯基环辛炔。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，所述卵磷脂为大豆卵磷脂。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，所述吲哚菁绿、卵磷脂和含有二苯并环辛炔的磷脂类物质的添加质量比为(40～80)：(6～12)：(4～8)。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，所述吲哚菁绿、卵磷脂含有二苯并环辛炔的磷脂类物质的添加质量比为50：9：6。
[0034]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一溶剂为丙酮或乙腈。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述第二溶剂为质量分数为2
‑
10％的乙醇。
[0036]在本专利技术的一些实施方式中，所述第二溶剂为质量分数为3
‑
5％的乙醇。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中，所述超声采用超声波细胞破碎仪进行，频率为10
‑
30kHz，功率为30
‑
40W，时间为3
‑
8min。
[0038]在本专利技术的一些实施方式中，所述纳米颗粒的制备还包括超滤步骤，所述超滤采用8
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12KDa的超滤管进行超滤。
[0039]在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巨噬细胞纳米颗粒复合物，其特征在于，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物为巨噬细胞通过N3
‑
DBCO连接纳米颗粒得到。2.根据权利要求1所述的巨噬细胞纳米颗粒复合物，其特征在于，所述巨噬细胞纳米颗粒复合物的粒径为130
‑
180nm。3.一种如权利要求1所述的巨噬细胞纳米颗粒复合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1、在巨噬细胞表面修饰叠氮基团；S2、制备纳米颗粒：将疏水性多聚物溶于第一溶剂，得到第一混合溶液，将吲哚菁绿、卵磷脂和含有二苯并环辛炔的磷脂类物质溶解于第二溶剂得到第二混合溶液，将第一混合溶液逐滴加入到第二混合溶液中，超声3
‑
8min，得到纳米颗粒；S3、将步骤S1制备得到的表面修饰叠氮基团巨噬细胞与步骤S2制备得到的纳米颗粒进行连接，制备得到巨噬细胞纳米颗粒复合物。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述在巨噬细胞表面修饰叠氮基团包括以下步骤：诱导巨...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡林涛，陈泽，郑明彬，吴锋，石敏，刘状，侯嘉睿，
申请(专利权)人：珠海中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：