绞股蓝皂苷元D含量的测定方法技术

本申请公开了药品检测技术领域中一种绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，包括1)将绞股蓝皂苷元D标准品溶于甲醇溶液制成标准品溶液，以标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；色谱条件：色谱柱的固定相为ODS，其粒径≤5μm；以乙腈

【技术实现步骤摘要】
绞股蓝皂苷元D含量的测定方法


[0001]本专利技术涉及药品检测
，具体涉及一种绞股蓝皂苷元D含量的测定方法。

技术介绍

[0002]绞股蓝(学名：Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino)葫芦科、绞股蓝属草质攀援植物，性寒、味苦，具有清热解毒、止咳清肺祛痰、养心安神、补气生精之功效，可用于降血压、降血脂、护肝、促进睡眠以及肠胃炎、气管炎、咽喉炎的治疗，并用于多种癌症的抗癌临床治疗。前期研究发现，绞股蓝中的有效成分主要是达玛烷型三萜皂苷类成分，约有180余种三萜皂苷类成分从绞股蓝中被发现(沈子琳et al.,2020；史琳et al.,2017)。有文献报道皂苷类成分口服给药生物利用度低，通常经由胃肠道水解后，以苷元的形式吸收发挥药效(宋玮et al.,2018)。并且已有文献报道绞股蓝皂苷水解后的苷元在抗肿瘤和降血糖等方面表现出较好的活性(史琳et al.,2017)。在对绞股蓝皂苷的水解产物的研究中发现，绞股蓝皂苷元D(Gypensapogenin D)是含量最高的一种皂苷元成分，有文献报道绞股蓝皂苷元D具有抗肿瘤的活性(N.Li et al.,2012)。然而，在研究中也发现绞股蓝皂苷元D是一种难溶于水的化学成分，这就决定了其口服生物利用度低，局限了其临床治疗效果的发挥。另外，如何对绞股蓝皂苷元D的含量进行测定来确保其质量，也是现有技术亟需解决的。

技术实现思路

[0003]本专利技术针对现有技术的不足，设计一种利用高效液相色谱测定绞股蓝皂苷元D含量的方法。
[0004]本专利技术的目的之一是提供绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，包括以下步骤：
[0005]1)将绞股蓝皂苷元D标准品溶于甲醇溶液制成标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；
[0006]色谱条件：色谱柱的固定相为碳十八烷基硅烷键合硅胶，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径≤5μm；以体积比为80～100％的乙腈
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水为流动相进行洗脱，检测波长为260.4nm；
[0007]2)将待测的含有绞股蓝皂苷元D的溶液溶于甲醇溶液中制成供试品溶液；
[0008]3)按照步骤1)的色谱条件，取等体积的标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定所述标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，得到所述供试品中绞股蓝皂苷元D的含量。
[0009]其中，绞股蓝皂苷元D的结构式如下：
[0010][0011]进一步，所述甲醇溶液为体积比为80％以上的甲醇水溶液或纯甲醇。
[0012]进一步，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm、4μm或3.5μm。
[0013]进一步，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm。
[0014]进一步，所述色谱柱的理论塔板数按绞股蓝皂苷元D峰计算不低于3000。
[0015]进一步，含有绞股蓝皂苷元D的溶液为绞股蓝皂苷元D脂质体。
[0016]本专利技术的测定方法不但可用于绞股蓝皂苷元D脂质体中绞股蓝皂苷元D的含量测定，也可用于其它含绞股蓝皂苷元D制剂的检测。
[0017]本专利技术的方法包括：配制标准品溶液、供试品溶液，高效液相色谱检测，计算供试品中绞股蓝皂苷元D的含量几个步骤，该方法能特异性检测绞股蓝皂苷元D脂质体中绞股蓝皂苷元D的含量，色谱峰分离良好、无干扰、线性好、精确度高、重复性、回收率、稳定性高。
[0018]进一步，绞股蓝皂苷元D脂质体中绞股蓝皂苷元D含量的测定方法的具体步骤为：
[0019]1)取绞股蓝皂苷元D标准品，以甲醇溶液配制成1ml含有0.4mg绞股蓝皂苷元D的标准溶液；在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统：
[0020]色谱条件：固定相为碳十八烷基硅烷键合硅胶，所述色谱柱的规格为250
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4.6mm，碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，以乙腈
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水(90：10)等度洗脱；流速：1mL/min；检测波长：260.4nm；进样量：20μL；柱温：30℃。
[0021]2)取待测的绞股蓝皂苷元D脂质体，以甲醇溶液配制成供试品溶液。
[0022]3)按照步骤1)的色谱条件，分别将等体积的标准品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定标准品溶液及供试品溶液的峰面积，按外标法计算绞股蓝皂苷元D脂质体中绞股蓝皂苷元D的含量。
[0023]本专利技术的目的之二时提供绞股蓝皂苷元D脂质体的制备方法，包括称取卵磷脂、胆固醇和绞股蓝皂苷元D，加入适量氯仿
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甲醇溶液溶解，于40℃恒温水浴减压旋蒸后，除去有机溶剂，待瓶壁上形成均匀透明的薄膜时，加入磷酸盐缓冲液适量，40℃下常压水合1～1.5h，充分振摇至水合完全，以25％超声功率、超声20min，最终得到绞股蓝皂苷元D脂质体。
[0024]进一步，绞股蓝皂苷元D：卵磷脂：胆固醇的质量比为1：8：1，卵磷脂优选蛋黄卵磷脂，氯仿
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甲醇的体积比为3:1。
[0025]绞股蓝皂苷元D脂质体的制备方法具体步骤为，准确称量处方量的蛋黄卵磷脂，胆固醇和绞股蓝皂苷元D(药物/蛋黄磷脂/胆固醇比1：8：1)，加入适量氯仿
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甲醇(v/v＝3:1)溶解，置于干燥茄形瓶中，于40℃恒温水浴减压旋蒸后，氮吹10min以完全除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的薄膜，加入pH 7.4的磷酸盐缓冲液适量，40℃下常压水合1～1.5h，充分振摇至水合完全，经探针超声处理，以25％超声功率、超声20min，最终得到绞股蓝皂苷
元D脂质体。
[0026]本专利技术的目的之三是提供绞股蓝皂苷元D脂质体在制备α
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葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用。
[0027]脂质体作为一种新型药物载体，具有生物利用度高、生物相容性好、促进转运以及提高药物稳定性等优点。因此，本专利技术将绞股蓝皂苷元D制备成了脂质体，并建立了绞股蓝皂苷元D脂质体中绞股蓝皂苷元D的含量测定方法，可以控制绞股蓝皂苷元D脂质体的质量。
[0028]同时本专利技术还通过分子对接及α
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葡萄糖苷酶的抑制试验发现绞股蓝皂苷元D对α
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葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用。
附图说明
[0029]图1为绞股蓝皂苷元D脂质体处方考察结果图。
[0030]图2为绞股蓝皂苷元D标准品和绞股蓝皂苷元D脂质体样品的HPLC色谱图(A:不含绞股蓝皂苷元D空白脂质体；B:绞股蓝皂苷元D空白脂质体样品；C:绞股蓝皂苷元D标准品)。
具体实施方式
[0031]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0032]实施例1绞股蓝皂苷元D脂质体处方优化
[0033]通过查阅相关文献，发现影响脂质体包封率的主要因素有：药脂比、磷脂/胆固醇比、超声时间、超声功率等。以药物包封率为评价指标，对以上几个指标进行了单因素考察。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将绞股蓝皂苷元D标准品溶于甲醇溶液制成标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；色谱条件：色谱柱的固定相为碳十八烷基硅烷键合硅胶，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径≤5μm；以体积比为80～100％的乙腈
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水为流动相进行洗脱，检测波长为260.4nm；2)将待测的含有绞股蓝皂苷元D的溶液溶于甲醇溶液中制成供试品溶液；3)按照步骤1)的色谱条件，取等体积的标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定所述标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，得到所述供试品中绞股蓝皂苷元D的含量。2.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，其特征在于，所述甲醇溶液为体积比为80％以上的甲醇水溶液或纯甲醇。3.根据权利要求1所述的绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，其特征在于，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm、4μm或3.5μm。4.根据权利要求3所述的绞股蓝皂苷元D含量的测定方法，其特征在于，所述碳十八烷基硅烷键...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭道鹏，何芋岐，鲁艳柳，秦琳，张倩茹，吴迪，谢健，赵永霞，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：