一种细胞筛选微流控芯片制造技术

本实用新型专利技术提供一种微流控芯片，通过免疫磁珠捕获肿瘤细胞悬液中的特定免疫细胞，并在磁场的作用下实现免疫细胞的分离。所述细胞筛选微流控芯片包括通道板和上盖板；通道板上设置微流通道，微流通道前端设置进液口，微流通道上连通设置至少一个细胞分离腔，微流通道末端设置废液出口；其中细胞分离腔与上盖板形成腔室；所述腔室的至少一侧和/或底部设有磁体。上述技术方案实现了快速，简便，高效，准确地分离细胞，同时可以了解不同TIL的变化情况并对其进行分析，并可实现大规模临床应用。并可实现大规模临床应用。并可实现大规模临床应用。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞筛选微流控芯片


[0001]本技术属于生物检测领域，涉及一种适用于免疫磁珠细胞分离的微流控芯片。

技术介绍

[0002]肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是一群位于肿瘤间质的异质性淋巴细胞，包括T细胞和 NK细胞，可有效识别、抵抗、攻击肿瘤细胞。这些细胞除了可通过释放细胞毒素直接杀伤癌细胞外，还可通过调节身体的免疫力来提高身体对癌细胞的杀伤能力。肿瘤浸润淋巴细胞疗法，是通过将癌症患者肿瘤组织中的TIL进行分离与纯化，并在体外培养后将其扩增活化，再回输给患者，从而达到抑制或杀伤癌细胞的作用。TIL疗法是过继性免疫治疗的一种。由于TIL来自患者的肿瘤组织，因此能直接识别癌细胞的许多靶标，发挥抗肿瘤作用。一般的，肿瘤组织中数量最多的细胞是肿瘤细胞，免疫细胞的比例只占其中很小的一部分，如CD4+T细胞、CD8+T细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞等。
[0003]由于这些免疫细胞发挥着不同的作用效果，因此需要一种准确的TIL分离设备，以帮助研究者们了解不同TIL的变化情况。目前只要通过流式细胞仪对细胞进行分选，但是流式细胞仪成本高，难以广泛普及应用。因此需要一种快速，简便，高效，准确的TIL 分离设备，以帮助研究者们了解不同TIL的变化情况，并对其进行分析以及大规模临床应用。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本技术提供一种微流控芯片，通过免疫磁珠捕获肿瘤细胞悬液中的特定免疫细胞，并在磁场的作用下实现免疫细胞的分离。所述细胞筛选微流控芯片包括通道板和上盖板；通道板上设置微流通道，微流通道前端设置进液口，微流通道上连通设置至少一个细胞分离腔，微流通道末端设置废液出口；其中细胞分离腔与上盖板形成腔室；所述腔室的至少一侧和/或底部设有磁体。
[0005]所述上盖板用于密封所述微流通道和/或细胞分离腔，使流体注入微流控芯片后在所述所述微流通道、细胞分离腔中流动，而不发生外溢。
[0006]所述微流通道设置于通道板，流道的大小以能顺利通过肿瘤细胞悬液为准，优选地，流道截面面积为4
×
102μm2‑1×
106μm2。
[0007]其中，进液口包括设置于微流通道前端的样本进液口和缓冲液进液口，样本进液口和缓冲液进液口与微流通道连通。优选地，所述样本进液口和缓冲液进液口呈Y型结构与微流通道连通。其中，所述样本是包含肿瘤细胞的样本，特别是经消化后的肿瘤细胞悬液。
[0008]本技术中，一种实施方式是免疫磁珠预先设置于腔室中，且不同免疫标记物的免疫磁珠位于不同的腔室中。即，不同的腔室唯一且确定地设置某一种类型的免疫磁珠。在磁场的作用下，磁珠贴附于腔室的至少一个内壁上。所述内壁包括腔室的侧壁、下壁、上壁。含肿瘤细胞的悬液流经腔室过程中，特定的免疫细胞与免疫磁珠的标记物结合，实现免疫细胞被免疫磁珠捕获。
[0009]本技术中，另一种实施方式是免疫磁珠通过进料通道投放。具体地，微流控芯片上设有至少一个免疫磁珠的进料通道。在更具体的一种实施方式中，免疫磁珠的进料通道设置于上盖板上，进料通道的一端与注射器相连接，另一端与腔室连通。在另一种具体的实施方式中，免疫磁珠的进料通道与微流通道连通。
[0010]此外，所述免疫磁珠的进料通道不限用于免疫磁珠的进料，所述免疫磁珠的进料通道为与腔室连通的孔道。在另外的实施例中，所述免疫磁珠的进料通道还可连接计量泵、真空泵、注射器等。
[0011]为了使免疫磁珠与细胞混合，特别是使免疫磁珠的免疫标记蛋白能够充分捕获特定的细胞，在腔室或微流通道中设置扰流部件。所述扰流部件包括设置于微流通道或腔室中的扰流板、扰流块、或扰流柱。
[0012]为了便于被免疫磁珠捕获的细胞随磁场偏转流向腔室的一侧或两侧，优选地，在腔室内设置导流组件。一种优选的实施方式为，导流组件为鱼骨型导流挡板。
[0013]为了便于被免疫磁珠捕获的细胞从腔室中分离，优选地，在免疫磁珠偏移一侧的腔室内壁上开设捕获细胞出口。免疫磁珠捕获的细胞在磁场的作用下，偏移至腔室的侧壁并富集，通过在腔室内壁开设捕获细胞出口，使偏移至腔室的侧壁的细胞通过所述捕获细胞出口流出并收集。在更优选的方案中，所述连通捕获细胞出口的流道上设有阀，用于控制捕获细胞流出流道的开闭。
[0014]本技术中，不同的免疫磁珠分别位于不同的腔室中。免疫磁珠选自标记有：CD45、 CD11b、F4/80、CD206、CD86，MDSC：CD45、CD11b、Ly
‑
6G或Ly
‑
6C标志物的免疫磁珠，用于捕获巨噬细胞，或标记有：CD45，CD3，CD8或CD4标志物的免疫磁珠，用于捕获T 细胞。
[0015]在优选的实施方式中，在微流通道上依次设置4个连通的腔室，4个腔室分别置入标记有CD4标记物的免疫磁珠、标记有CD8标记物的免疫磁珠、标记有CD86标记物的免疫磁珠、标记有CD206标记物的免疫磁珠。
[0016]本技术一个优选的实施方式是所述细胞分离腔被设置为可拆装的细胞分离腔模块。该种实施方式中，通道板具有可拆装的结构。其中，每个细胞分离腔模块上设置有细胞分离腔，且每个细胞分离腔在模块组合后与上盖板形成腔室。组合后的细胞分离腔依次设置于微流通道上且相互连通。该种实施方式形成的腔室具有与非块化的腔室具有相同的结构。
[0017]本技术通过上述技术方案实现了快速，简便，高效，准确地分离TIL，研究者可以了解不同TIL的变化情况，并对其进行分析并可实现大规模临床应用。
附图说明：
[0018]图1：用于肿瘤侵润淋巴细胞分离与纯化的免疫磁珠微流控芯片立体示意图。
[0019]图2：用于肿瘤侵润淋巴细胞分离与纯化的免疫磁珠微流控芯片平面示意图。
[0020]图3：磁体设置于腔室正下方时免疫磁珠位置示意图。
[0021]图4：磁体设置于腔室一侧时免疫磁珠偏转示意图。
[0022]图5：免疫磁珠结构示意图。
[0023]其中：1为通道板，2为上盖板，3为磁体，11为微流通道，12为进液口，121为样本进液口，122为缓冲液进液口，13为细胞分离腔，14为废液出口，15为免疫磁珠进料通道，16为
免疫磁珠。
具体实施方式：
[0024]下面通过具体实施方式来进一步说明本技术的技术方案。
[0025]实施例1：肿瘤侵润淋巴细胞在微流控芯片种的分离
[0026]本实施例首先提供了一种微流控芯片，结构如下：细胞筛选微流控芯片包括通道板 1和上盖板2；通道板上设置微流通道11，微流通道前端设置样本进液口121和缓冲液进液口122，样本进液口和缓冲液进液口呈Y型结构与微流通道连通。微流通道上连通设置4个细胞分离腔13，微流通道末端设置废液出口14。其中细胞分离腔与上盖板形成腔室；所述腔室的两侧设有磁体3。免疫磁珠预先设置于腔室中，沿细胞悬液流动方向依次在腔室中置入标记有CD4+T标记物的免疫磁珠、标记有CD8+T标记物的免疫磁珠、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞筛选微流控芯片，其特征在于，包括通道板(1)和上盖板(2)；通道板上设置微流通道(11)，微流通道前端设置进液口(12)，微流通道上连通设置至少一个细胞分离腔(13)，微流通道末端设置废液出口(14)；其中细胞分离腔与上盖板形成腔室；所述腔室的至少一侧和/或底部设有磁体(3)。2.根据权利要求1所述的细胞筛选微流控芯片，其中，所述进液口包括设置于微流通道前端的样本进液口(121)和缓冲液进液口(122)，样本进液口和缓冲液进液口与微流通道连通。3.根据权利要求1所述的细胞筛选微流控芯片，其中，所述微流控芯片设有至少一个与腔室连通的免疫磁珠进料通道(15)。4.根据权利要求3所述的细胞筛选微流控芯片，其中，在腔室或微流通道中设...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄杰，华权高，王子峰，
申请(专利权)人：浙江生研生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：